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背景:卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤之首。肿瘤细胞的遗传不稳定性和高突变率所导致的对化疗药物耐药性的增加是卵巢癌复发率较高和成为不治之症的主要原因。肿瘤的侵袭和转移与血管新生密切相关。体内外实验证实,原发性恶性肿瘤细胞中存在多种促进和抑制血管形成因子,抑制血管形成可能成为治疗人类恶性肿瘤最有价值的战略之一。Endostatin是一种特异性血管内皮生长抑制因子,尽管目前研究仍处于实验阶段,但其应用前景十分广阔。动物实验已证实Endostatin具有强效抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤生长、侵袭和转移的作用,且具有治疗后不易复发、反复应用不产生耐药性、毒副作用极低、对各期肿瘤均有效等优点。作为治疗用药,Endostatin有希望用于任何病态的血管生成,最近有报道显示Endostatin配合外科手术、化疗、放疗和免疫治疗等传统方法,可显著提高其抗肿瘤效果。
目的:检测Endostatin在上皮性卵巢癌组织中的表达,及其与疾病病理特征及预后的关系;研究在上皮性卵巢癌组织中Endostatin蛋白对Bcl-2/Bax蛋白表达的影响,初步分析其相关性;检测Endostatin对卵巢癌细胞系SKOV3细胞生长增殖、凋亡、细胞周期及凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax表达的影响;利用BALB/C裸鼠和人卵巢癌细胞株SKOV3建立裸鼠皮下移植瘤,研究Endostatin抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡的作用,及初步探讨其在卵巢癌组织中作用的机制。
方法:1、RT-PCR方法检测EndostatinmRNA在上皮性卵巢癌组织中的表达,并分析其表达与疾病病理特征的关系;免疫组织化学法检测上皮性卵巢癌组织中Endostatin蛋白对Bcl-2/Bax蛋白表达的影响;2、应用体外细胞培养、MTT法检测Endostatin对人卵巢癌细胞SKOV3生长增殖的作用;透射电镜法和流式细胞仪技术检测Endostatin作用后细胞的凋亡情况及对细胞周期的影响;免疫细胞化学法、RT-PCR法及Westernblot法研究Endostatin对SKOV3细胞Bcl-2/Bax蛋白表达的影响;3、建立卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤,观测Endostatin抑制肿瘤的生长;透射电镜法和TUNEL法研究Endostatin诱导肿瘤细胞凋亡的情况;免疫组织化学法、RT-PCR法及Westernblot法研究Endostatin对裸鼠皮下移植卵巢肿瘤组织中Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。
结果:1、上皮性卵巢癌组织中,EndostatinmRNA表达明显高于正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织(p<0.05);Endostatin在晚期卵巢癌组织中mRNA表达高于早期卵巢癌组织(p<0.05);2、上皮性卵巢癌组织中,Endostatin蛋白表达与Bcl-2蛋白表达成负相关,与Bax蛋白表达无明显相关性;3、Endostatin体外能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖(p<0.01),并可诱导其发生凋亡;4、Endostatin作用后可引起SKOV3细胞周期中G0/G1期细胞增多,S、G2/M期细胞减少;5、在SKOV3细胞中,Endostatin对Bcl-2/Bax蛋白的表达无明显影响;6、Endostatin可有效抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长(p≤0.05);7、Endostatin能促进肿瘤细胞的凋亡;8、在裸鼠皮下移植瘤组织中,Endostatin可下调Bcl-2蛋白的表达,对Bax蛋白的表达无明显影响。
结论:在上皮性卵巢癌组织中,Endostatin过度表达可能与上皮性卵巢癌的发生有关;Endostatin的高表达可能与上皮性卵巢癌的进展有关;Endostatin不仅能够体外抑制卵巢癌细胞增殖,而且可以抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,并诱导卵巢癌细胞和肿瘤细胞凋亡的发生;在上皮性卵巢癌组织中,Endostatin蛋白表达与Bcl-2蛋白表达成负相关,其作用机制可能与凋亡调控基因Bcl-2/Bax表达的改变相关。