【摘 要】
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[背景与目的]Mauro[1]等1961年首次在蛙骨骼肌中发现,肌卫星细胞是一种源于胚胎中胚层的干细胞。肌卫星细胞的增殖和成肌分化受到多种生长因子的调节,有人推测其中的基质衍生因
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[背景与目的]Mauro[1]等1961年首次在蛙骨骼肌中发现,肌卫星细胞是一种源于胚胎中胚层的干细胞。肌卫星细胞的增殖和成肌分化受到多种生长因子的调节,有人推测其中的基质衍生因子-1(SDF-1)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素样生长因子1(IGF1)等三个因子在肌肉再生的起始阶段可能起着重要作用。细胞因子需通过相应受体的介导才能发挥其功能,而基质细胞衍生因子受体(CXCR4)、肝细胞生长因子受体(c-Met)和胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)被认为是上述三个因子的特异性受体。本课题旨在观察CXCR4,c-Met和IGF1R在正常肌肉组织和注射心脏毒素后所致的肌肉损伤的股四头肌中肌卫星细胞的表达情况,为进一步研究某些肌肉变性疾病如进行性肌营养不良(DMD)在发病中的分子机制和治疗肌肉退行性变提供参考依据。[方法]C57雄性小鼠14只,饲养于IVC(独立送排风笼具)实验室。随机分为7组,1~6组左侧股四头肌局部注射心脏毒素(5μg/只),右侧股四头肌为对照,第7组用于分离正常肌卫星细胞。1~6组分别在注射后1d,4d、1w、2w、4w、6w颈椎脱臼处死小鼠,完整分离出股四头肌。浸入4%甲醛溶液中固定,常规病理包埋切片染色,与对照C57小鼠股四头肌进行组织学和免疫组织化学比较分析。取上述股四头肌与对照C57小鼠股四头肌进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)比较分析,了解三个受体的原位表达情况。从非注射组C57小鼠股四头肌中分离出肌卫星细胞,观察细胞生长情况,利用免疫细胞化学方法和流式细胞技术,检测三个受体在肌卫星细胞的体外表达情况。[结果]免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应结果显示:正常小鼠股四头肌中CXCR4,c-Met和IGF1R在肌卫星细胞上仅有少量的表达;与对照组比较,实验组注射心脏毒素24h后,三个受体表达即明显增加并持续到观察终点的第六周,其中CXCR4、IGFIR表达量在第二周达到高峰,c-Met表达量在第一周达到高峰,且直到观察期间末(第6周),其表达量仍高于正常肌肉组织。从非注射组股四头肌分离的肌卫星细胞做免疫细胞化学和流式细胞检测显示:CXCR4、c-Met和IGF1R仅有少量的表达,其中流式细胞检测结果CXCR4阳性表达率为4.6%,c-Met阳性表达率为3.0%,IGF1R阳性表达率为3.3%。[结论]1.本文首次使用心脏毒素骨骼肌注射模型,探讨CXCR4、c-Met和IGFIR在骨骼肌再生过程中的作用;结果提示,CXCR4、c-Met和IGF1R可能是肌肉损伤修复过程的关键蛋白。2.本实验通过改进骨骼肌卫星细胞培养方法,使肌卫星细胞纯度明显增高。 [
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