柴朴汤对气道上皮细胞中MAL表达的调控作用

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目的阐明柴朴汤调控气道上皮细胞表达T细胞成熟相关蛋白(T-lymphocytematuration associated protein T,MAL)的分子机制,明确柴朴汤上调MAL能减少气道上皮细胞分泌转化生长因子-β1(Transfoming growth factor-β1,TGF-β1)。方法健康雄性SD大鼠32只,体重(250±10) g,随机分为4组,每组各8只,即柴朴汤高(3.00g/kg)、中(1.50g/kg)、低(0.75g/kg)剂量组、生理盐水组,一日2次,连续7天灌胃。所取血清分别为柴朴汤高、中、低剂量血清组、生理盐水血清组。健康雄性SD大鼠32只,体重(250±10) g,卵蛋白、氢氧化铝致敏,复制哮喘模型后,分离血清为哮喘血清组,并取肺组织行HE染色。取生长良好的大鼠气道上皮细胞进行实验分组,共分5组: A组(正常血清组),B组(柴朴汤高剂量血清组+哮喘血清组)、C组(柴朴汤中剂量血清组+哮喘血清组)、D组(柴朴汤低剂量血清组+哮喘血清组)、E组(生理盐水血清组+哮喘血清组)、F组(哮喘血清组)。用半定量RT-PCR检测RTE中MAL、TLR-4、NF-κB、TGF-β1mRNA的表达。用免疫细胞化学检测MAL、TLR-4、NF-κB、TGF-β1蛋白在气道上皮细胞中的表达。结果1、大鼠肺组织病理变化情况正常大鼠气道管壁结构完整,周围无炎症细胞浸润,肺泡结构形态未见破坏;哮喘模型组大鼠气道壁及平滑肌明显增厚,管腔变窄,大部分肺泡破坏、融合,肺泡腔扩大,肺泡间隔断裂。2、大鼠气道上皮细胞中MAL、TLR-4、NF-κB、TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平MAL mRNA和蛋白在A组中表达最强,与其余组比较差异有显著性(P<0.05);哮喘血清干预后E、F组MALmRNA和蛋白明显减弱;柴朴汤血清干预后B、C、D组MALmRNA和蛋白较E、F组有所增强(P<0.05),B、C、D组分别与E、F组比较差异有显著性(P<0.05)。TLR-4、NF-κB、TGF-β1mRNA和蛋白在A组表达最弱,与其余组比较差异有显著性(P<0.05);哮喘血清组干预后E、F组TLR-4、NF-κB、TGF-β1mRNA和蛋白的表达明显增强,均高于柴朴汤干预后B、C、D组(P<0.05)。B、C、D组TLR-4、NF-κBmRNA和蛋白的表达分别与E、F组比较差异有显著性(P<0.05)。B、C组TGF-β1mRNA和蛋白的表达分别与E、F组比较差异有显著性(P<0.05)。结论1、哮喘血清刺激气道上皮细胞后MAL表达下调,TLR-4、NF-κB、TGF-β1表达上调。2、柴朴汤可调控气道上皮细胞MAL、TGF-β1表达,机制可能与TLR-4/NF-κB有关。
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