论文部分内容阅读
就巢性是制约番鸭繁殖主要原因之一,但其就巢机制目前仍不明确。本试验运用同位素相对和绝对定量(iTRAQ)和代谢组学技术及生物信息学,系统地分析番鸭在就巢期与产蛋期的卵巢组织蛋白质及小分子代谢物组成的变化,并进行相关代谢通路分析;主要结果如下:1、番鸭就巢期(Nest)与产蛋期(Laying)卵巢组织蛋白质组学分析利用iTRAQ技术对番鸭卵巢组织总蛋白进行相对和绝对定量分析。分别对含有三个生物学重复样本的番鸭产蛋期和就巢期卵巢组织蛋白表达进行iTRAQ定量结果分析。结果显示,共有297472张二级图谱生成,在“1%FDR”过滤标准下,共有11708条肽段和2759个蛋白质被鉴定到。以产蛋期为对照组,以p<0.05为筛选标准,共得到了 335个差异蛋白质,其中139个蛋白表达上调,196个蛋白表达下调。就巢组上调倍数较大的蛋白质有APOV1,甘丙肽(GAL),血清淀粉样蛋白A(SAP),热休克蛋白β-1(HSPB1);下调倍数较大的蛋白质有极低密度脂蛋白受体(VLDLR),细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1),G-蛋白((Gβγ),1,4,5-三磷酸肌醇受体1型(IP3R)。对差异表达的蛋白质进行GO功能注释和Pathway分析发现:类固醇生物合成(Steroid biosynthesis),钙信号通路(Calcium signaling pathway),卵母细胞减数分裂(Oocyte meiosis),类固醇激素生物合成(Steroid hormone biosynthesis),GnRH 信号通路(GnRH signaling pathway),PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)等可能是参与调控番鸭就巢性状相关的通路。挑选16个差异表达的蛋白质,用qRT-PCR方法在转录水平上检测。其中6个基因mRNA的表达量与iTRAQ定量中蛋白质表达量趋势相反,说明蛋白质合成受多方面调控;10个基因的mRNA的表达量与iTRAQ定量中蛋白质表达量基本相同,说明iTRAQ技术用来研究番鸭卵巢组织蛋白质组成具有可行性、准确性。2番鸭就巢期(N)与产蛋期(L)卵巢组织代谢组学分析运用代谢组学方法对番鸭就巢性进行研究,各取10只产蛋期与就巢期的番鸭卵巢组织进行代谢组学分析。以产蛋期为对照组,研究产蛋期与就巢期的卵巢组织小分子代谢物的差异,发现孕酮等10个差异表达的代谢物,可能成为潜在区分就巢期与产蛋期的生物标记物。通过KEGG数据库发现,这些差异的代谢物富集在类固醇激素生物合成,类固醇生物合成,氨基酸代谢等代谢途径。通过筛选与番鸭就巢性相关的候选蛋白和生物标志物,初步揭示番鸭就巢性状的相关调控机制,为研究番鸭就巢性状提供理论基础。