细菌非编码小RNA(sRNA)在菌体的应激反应中起重要作用,但很少有研究探讨sRNA在乳酸乳球菌中的功能。本课题组之前的研究表明,在pH 5.0条件下将菌株应激之后,RNA深度测序和验证发现19个sRNA在酸性条件下高表达,其调控机制有待深入研究。经过筛选,我们确定了一个新的sRNA c277,其在酸胁迫条件下高表达,并利用Northern blot和qRT-PCR实验进行了验证。进一步通过快速扩增cDNA末端(RACE)实验确定了c277的全长为317 nt。并构建c277敲除和过表达菌株进行耐酸实验,与野生型乳酸乳球菌F44相比,c277过表达菌株的存活能力降低,c277缺失菌株的存活力增强。为了进一步探索c277的调控机制,对敲除菌株与野生型菌株进行了蛋白质组学对比分析,一系列氨基酸转运及代谢基因和转录调控因子等受到c277的影响。同时用生物信息学方法预测了c277潜在的靶标基因,结合蛋白组学和软件预测结果,选取6个靶标进行荧光蛋白融合和点突变实验证实。结果显示,c277存在一个潜在保守区(GCCTTTC),可直接与靶标核糖体结合位点进行碱基互补配对抑制三种氨酰tRNA合成酶,Alas,Thrs和Tyrs,和一种转录调节因子YthA的表达。此外,我们课题组之前发现YthA增加了几种氨基酸合成途径,特别是精氨酸,因此间接证明c277可能通过YthA影响精氨酸合成。总体而言,本研究模拟了c277的潜在调控网络,揭示了酸应激反应的调节机制。另外,构建了人工sRNA文库,从中筛选出了能够抑制glnR表达的人工sRNA。构建过表达菌株,其表现出优于野生型的耐酸性,并且有效的提高了菌株的nisin产量,为构建高产菌株提供了新的思路。