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野鸟作为禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的天然宿主,在流感病毒的传播扩散中起着重要的的作用,尤其是迁徙鸟类,在迁徙的过程中与当地的家禽或留鸟密切接触,进而加快了禽流感病毒的传播扩散。近些年,H5N1、H5N8高致病性禽流感疫情在世界范围内迅速而广泛地传播扩散,这些均表明禽流感病毒及其疫情的传播扩散与野鸟迁徙密切相关。因此,为了证明野鸟迁徙活动对流感病毒传播的影响,本论文以大天鹅作为主要研究对象,在其中亚迁徙路线上开展野鸟流感病毒的监测研究。课题组前期研究数据表明,河南三门峡是中亚迁徙路线上大天鹅的主要越冬地,蒙古国、俄罗斯是其繁殖地,内蒙古是大天鹅在我国境内的主要迁徙停歇地。因此本论文于2014年12月至2016年12月期间在我国境内大天鹅中亚迁徙路线上的主要越冬地和停歇地采集样品4792份,其中大天鹅样品2087份,其他鸟类样品2705份,共分离得到AIV病毒103株,其中从大天鹅中分离到97株AIV,从其他物种仅分离到6株AIV,表明大天鹅是禽流感病毒的易感物种。从不同地区的病毒分离时间可以推测出高致病性H5N1流感病毒的传播路线可能为:河南三门峡-内蒙-俄罗斯,这与大天鹅春季的迁徙路线是完全一致的,且迁徙时间也是吻合的。遗传进化分析结果显示,8株H5N1分离株的8个基因均与俄罗斯毒株A/rook/Chany/32/2015(H5N1)和内蒙毒株A/Black-necked Grebe/Inner Mongolia/Trachea3/2015(H5N1)的同源性较高(≥98.3%,≥98.6%),且亲缘关系较近。说明大天鹅在禽流感病毒传播中具有重要作用。从不同地区的病毒分离时间可以推出高致病性H5N8禽流感病毒的传播路线为俄罗斯-内蒙-河南三门峡。遗传进化分析结果显示,9株H5N8分离株的7个基因(除PA基因)与1株内蒙分离株MS/IM/Q3-4/2016(H5N8)和俄罗斯乌布苏湖的毒株A/common tern/Uvs-Nuur Lake/26/2016(H5N8)的同源性较高(≥98%,≥98.7%),并且与其亲缘关系也较近,PA基因与MS/IM/Q3-4/2016(H5N8)的同源性较低(≥96.6%),而与A/common tern/Uvs-Nuur Lake/26/2016(H5N8)的同源性较高(≥98.9%)。同时本研究跟踪的1只大天鹅2016年11月从俄罗斯乌布苏湖迁徙返回河南三门峡后死亡,实验室确诊为高致病性H5N8流感病毒,经序列比对,毒株A/whooper swan/Henan/Q2/2016(H5N8)的序列与俄罗斯病毒A/common tern/Uvs-Nuur Lake/26/2016(H5N8)同源性较高(≥98.9%),因此,本研究找到了大天鹅长距离迁徙并传播高致病性H5N8流感病毒的确切证据。本研究分离的所有低致病性毒株的部分基因或全部基因均与蒙古国的毒株同源性较高(≥98.3%),且遗传关系较近,这说明大天鹅在中国与蒙古国流感病毒传播与基因交流中具有重要作用。综上所述,本研究证实大天鹅是禽流感病毒的易感物种,并且在传播禽流感病毒,尤其是高致病性禽流感病毒中具有重要的作用。