一株蜡样芽孢杆菌的鉴定及其抑菌物质的分离纯化与性质的研究

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利用选定的微生物自然产生的代谢副产物抑制不良微生物的生长,用于食品防腐剂和生物防治等方面,吸引了很多科研注意力。本文对酱渣中分离到的一株产抑菌物质的蜡样芽孢杆菌进行鉴定,并研究其所产抗菌物质的部分性质和对其结构进行了初步的鉴定。其结果如下:1)本文进行了菌株B的生理生化试验,测定了菌株B的16S rDNA的序列,输入GenBank中进行同源性比较后建立了系统发育树,并优化了其培养条件。研究结果表明:确定菌株B为蜡样芽孢杆菌;其最适生长条件:100ml/250ml的装液量和0.5%接种量、摇床转速是200r/min、37℃、初始pH7.0的KMB振荡培养时菌株生长量最大,在盐度为12%的培养基中仍能正常生长。2)对蜡样芽孢杆菌B所产抑菌物质,测定其抑菌谱、抑菌作用方式、抑菌物质作用的最适合培养基、拮抗活力及蛋白酶、温度和pH对其稳定性的影响,还有通过双缩脲、茚三酮反应推断其物质性质。研究结果表明:其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌都有良好的抑制作用;其对敏感菌的作用方式是抑制而非杀死;蜡样芽孢杆菌B的抑菌活性对数期开始,平稳期达到最大;蜡样芽孢杆菌B所产的抑菌物质对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感,说明其具备蛋白质的特性;双缩脲反应和茚三酮反应推断其为环状结构的多肽类物质;该抑菌物质对热稳定,在50℃~100℃范围内,抑菌活性都没明显变化;在pH3~11,仍有抑菌活性,但最适pH是微酸性5~7范围内。3)测定纯化抗菌物质的最适硫酸铵浓度,通过薄层层析、高效液相、液质联用对分离的抗菌物质进行结构分析,研究结果如下:纯化该抗菌物质最适的硫酸铵浓度为65%;通过薄层色谱分析(thin layer chromatography,TLC)、高效液相、液质联用图谱分析,推断该肽类物质是闭合环状,含有自由氨基及含有Leu、Gln、His三种氨基酸,并没有和相关报道的脂肽抗生素、细菌素类有相似的地方,由于蜡样芽胞杆菌的抗菌物质报道较少,所以这可能是一种新物质。
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