目的1.建立大鼠肺间质纤维化模型;2.观察化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化形成的预防性治疗作用;3.探讨化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化模型肺组织MMP-2、TIMP-1蛋白表达的影响;4.对比化瘀理肺方与氢化可的松琥珀酸钠对大鼠肺间质纤维化模型肺组织细胞形态学及肺组织MMP-2、IIMP-1蛋白表达的差异。方法84只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为模型组21只(博莱霉素+生理盐水)、中药组21只(博莱霉素+化瘀理肺方)、激素组21只(博莱霉素+氢化可的松琥珀酸钠)、对照组21只(生理盐水+生理盐水)。用1%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔内注射麻醉,将大鼠仰卧位固定于实验台,固定头和四肢,开口器固定口腔,拉出舌,用压舌板压舌腹,在额镜直视下,趁动物吸气瞬间,迅速将与1ml注射器相连的带接头硬脊膜外麻醉导管插入气管1～2厘米,观察到导管内液柱随动物呼吸而波动后,前3组缓慢注入0.4%博莱霉素0.25ml(5mg/kg),第4组注入生理盐水0.25ml作为正常对照,注药后立即旋转动物,使药液在肺内均匀分布。从第2天开始,中药组每天给予化瘀理肺方药物灌胃(17190mg/kg),激素组每天给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25mg/kg),对照组和模型组每天给予生理盐水(2ml/只)灌胃。给药过程中观察动物的一般状况:动物活动、体型、皮毛、精神状态、摄食、粪便等。给药后第7、14、28天每组各处死7只,观察各组动物双肺外观差别,取左肺置于10%福尔马林中固定,常规石蜡包埋,连续4μm厚石蜡切片,行HE染色。用免疫组化法检测肺组织MMP-2、TIMP-1蛋白表达。结果1.一般状况观察:进入结果分析的大鼠84只,正常对照组大鼠活泼好动,强壮肥硕,皮毛光亮;模型组均表现为不同程度的咳喘,呆滞,精神差,造模型后第6天有6只出现拱背倦缩,瘦弱,2周后有1只毛枯,呈晦暗,无光泽;中药组开始表现与模型组相似,治疗1周后稍有好转,食欲可,治疗2周后明显好转,精神食欲较好;激素组和中药组表现无明显差别。2.肺组织大体观察:对照组双肺外观无异常,肺叶轮廓清晰,表面光滑,饱满呈粉红色,弹性好。模型组第7天双肺膨大,暗红色,可见散在的点状出血,第14天双肺膨大更明显,局部见大小不等灰白色结节样改变,弹性差;第28天双肺苍白,体积缩小,硬度增加,表面呈结节样改变。中药组与对照组相近,部分呈暗红色,偶见大小不等结节样改变,边缘有点状出血及部分肺叶体积缩小。激素组与中药组相似。3.肺泡炎、肺纤维化程度比较:正常对照组各观察点均无明显病变。模型组第7天可见肺野内多量炎性细胞,以淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞为主,可见少量成纤维细胞;第14天双肺炎性细胞较前增多,细胞成分相同,成纤维细胞、平滑肌细胞增殖,胶原纤维沉积,肺泡变形;第28天见双肺广泛纤维化,玻璃样变,细胞成分减少,肺泡大部分消失,但肺部炎性细胞浸润情况较前有所减轻。激素组、中药组肺泡炎程度同模型组比较有明显的减轻,第14天肺泡炎程度均达到高峰,此后较前减轻;肺纤维化程度较模型组也明显减轻,且中药组同激素组比较无统计学意义,肺纤维化的减轻程度有减缓的趋势,但同对照组比较仍较严重。4.MMP-2、TIMP-1免疫组化染色结果:正常肺组织中,血管内皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数细支气管粘膜上皮细胞的胞浆内MMP-2呈弱阳性,博来霉素作用后第7天病灶处上述细胞中MMP-2表达均增强,其中以肺间质内间质细胞及肺泡间隔和肺泡腔内的巨噬细胞阳性表达尤为明显,模型组最明显。第14天时模型组、激素组、中药组MMP-2表达仍在升高。第28天时模型组、中药组、激素组较第14天时表达明显降低,中药组较模型组表达明显减低,中药组与激素组表达无明显差异性。正常肺组织TIMP-1在肺泡及间质巨噬细胞、肺泡上皮、支气管上皮细胞、成纤维细胞及胶原染色均较浅。博莱霉素作用第7天后,上述部位细胞染色有所增强,第14天、28天时增强较第7天更为显著,随时间变化呈逐渐递增的趋势。中药组在第7、14、28天的表达均较正常对照组增高,但均较模型组低。结论1.化瘀理肺方对BLM致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化有预防性治疗作用;2.化瘀理肺方可能部分通过调节MMP-2、TIMP-1蛋白的表达发挥抗纤维化作用;