肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，转移能力强，近20年来其死亡率增加了41.8％，严重影响人们的身心健康甚至危及生命。目前运用手术、放疗、化疗以及免疫等方法来治疗肝癌，患者的生存率有明显提高，但是这些治疗方法选择性低，靶向性差。因此，随着分子生物学的飞速发展，基因靶向治疗肝癌的研究越来越受到关注。　　 人端粒酶是一种核蛋白复合物，具有维持和延长真核细胞染色体末端端粒结构，调节细胞增殖潜能和寿命的功能。端粒酶有三个主要组成部分：RNA亚基(hTR)，端粒酶相关蛋白1(hTP1)，具有催化活性的端粒酶逆转录酶(hTERT)。近年来研究表明端粒酶在85％-95％的恶性肿瘤细胞中有表达，而在正常细胞中几乎不表达，这说明端粒酶是细胞永生化和癌变的关键步骤，因此抑制端粒酶的活性是恶性肿瘤基因治疗的理想靶点。另外，由于端粒酶的活性是通过激活hTERT而实现的，端粒酶的活性与hTERT的表达密切相关，hTERT是端粒酶中最重要的成分，在细胞癌变中起限速作用，因此hTERT成为最具有吸引力的肿瘤治疗的靶标。　　 以端粒酶为靶点的肿瘤基因治疗研究中，主要采用RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术沉默hTERT基因，RNAi是生物进化过程中遗留下来的一种转录后通过RNA调控基因表达的机制。它通过小干扰RNA(smallinterferring RNA，siRNA)特异性地结合并降解靶向mRNA而起作用，siRNA是一种极具前景的基因靶向药物。本研究依据RNAi原理，以hTERT基因为靶点，用hTERT高表达的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象，设计靶向hTERT基因的小干扰RNA，通过体外转染肝癌SMMC-7721细胞，筛选出其有效序列，并观察其对细胞抑制生长效果，hTERT mRNA与蛋白表达情况及细胞凋亡情况，进一步探讨其机制，为肝癌的治疗探索一条新的途径。本研究内容如下：　　 第一部分：靶向hTERT siRNA有效序列的筛选根据GenBank中hTERT mRNA序列(AF015950)和siRNA设计软件，设计了6条21碱基的siRNA，化学合成法合成出双链siRNA，以Lipofectamin TM2000介导转染肝癌SMMC-7721细胞。分别采用SRB(磺酰罗丹明B)法，RT-PCR法评价其对细胞生长，hTERT mRNA表达的抑制作用。结果表明siRNA-2和siRNA-6能抑制SMMC-7721细胞的增殖及显著沉默hTERT基因，而其他四条无明显作用。　　 第二部分：RNA干扰抑制hTERT表达诱导SMMC-7721细胞凋亡在第一部分中，通过筛选，得到2条能高效抑制hTERT基因表达的siRNA：siRNA-2和siRNA-6。为了深入研究其机制，在此部分，这2条siRNA转染肝癌SMMC-7721细胞后，以PI单染法，检测它们对细胞周期的影响；以AnnexinV-FITC/PI双染法，检测它们对细胞凋亡的诱导作用；并以Western blot检测hTERT蛋白水平的变化及凋亡通路中Bcl-2，Bax，cyclin B1的表达水平，探讨凋亡产生的机制。结果表明有效序列siRNA能下调hTERT的表达，能迅速诱导SMMC-7721细胞凋亡，其机制主要是通过内源性凋亡途径中线粒体通路来实现。　　 结论：　　 1.以hTERT基因为靶点，设计合成了6条siRNA序列，从中成功筛选出两条有效序列siRNA，分别是hTERT-siRNA-2和hTERT-siRNA-6。　　 2.siRNA-2和siRNA-6转染细胞后能降低hTERT mRNA和蛋白的表达，证实了siRNA对SMMC-7721细胞中hTERT基因的序列特异性。　　 3.siRNA-2和siRNA-6转染SMMC-7721细胞后，能抑制细胞的生长，细胞周期发生阻滞，促进细胞凋亡，具有一定的体外抗肝癌作用，为肝癌的基因治疗提供实验基础。