发芽蚕豆γ-氨基丁酸富集与调控技术研究

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本研究采用低氧和NaCl联合胁迫方式处理蚕豆(启豆-2号),优化了发芽蚕豆富集GABA的培养条件和培养液组分,分析了添加氨基胍(DAO抑制剂)后,发芽蚕豆不同部位DAO活性、GABA及前提物含量变化,探明多胺降解途径对发芽蚕豆富集GABA的贡献率。研究Ca2+对发芽蚕豆GABA富集的影响,并在优化的培养条件和培养液培养下,考察了蚕豆发芽过程中主要生理生化指标和GABA含量的变化,以及GABA合成关键酶、相关底物的变化情况。主要研究结果如下:1、低氧联合NaCl胁迫下,培养时间、培养液pH和胁迫时间显著影响发芽蚕豆γ-氨基丁酸(GABA)积累。蚕豆发芽富集GABA最佳培养条件为:正常培养时间1.5d、培养液pH3.5和胁迫时间4d。MSG(谷氨酸钠)、CaCl2和VB6对发芽蚕豆GAD及GABA的影响均达到显著水平(P<0.05)。蚕豆富集GABA的最适培养液组分为MSG1.1mg/mL、CaCl26.1mmol/L和VB672μmol/L,此时,GABA富集量达到1.98±0.09mg/g DW,为对照的1.83倍。2、低氧联合NaCl胁迫下,用AG处理发芽1.5d的蚕豆,其芽长、DAO活性和GABA含量均受到显著抑制。当AG浓度为5mmol/L时,随着处理时间的延长,蚕豆生长发育、DAO活性、GABA含量均低于对照。低氧联合NaCl胁迫条件下蚕豆子叶和胚中GABA富集量分别有25.0%和29.3%由多胺降解途径提供。3、低氧联合NaCl胁迫下,CaCl2处理显著提高了发芽蚕豆子叶中GAD和DAO活性,使子叶中GABA含量比对照增加24.4%,而胚(非子叶部分)中GABA含量变化不显著。添加EGTA后,蚕豆子叶和胚中DAO活性均显著受到抑制,GABA含量明显降低。4、低氧联合NaCl胁迫条件下,添加MSG、CaCl2和VB6使蚕豆生长速度变慢,呼吸作用加强,发芽期间,淀粉含量降低,还原糖、可溶性蛋白和游离氨基酸等含量增加,GAD和DAO活性升高,GABA含量随之升高。相关性分析表明,GABA含量与GAD活性、Put和Spd含量之间呈显著正相关。
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