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目的本研究通过建立跨代遗传动物染毒模型,旨在探讨孕期2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)暴露对雌性子代大鼠卵巢功能损伤的跨代遗传效应,以及TCDD对雌性大鼠卵泡发育和功能影响的潜在机制,为卵巢早衰等疾病的预防提供理论基础。方法1.跨代动物模型的建立:SPF级性成熟Sprague-Dawley(SD)的大鼠按照雌雄比例2:1于晚8:00合笼,次日早8:00检查合笼雌性阴栓是否阳性,阴栓阳性者记为孕期第0天(Gestationday 0,GD0),将怀孕母鼠(F0)随机分为三组(10只/组):对照组、100 ng/kg TCDD处理组(低剂量组)和500 ng/kg TCDD处理组(高剂量组),并于GD 8-14每天经口灌胃。F0代分娩的仔鼠为F1代。从F1代每窝中随机选取1只雌鼠,单独饲养至8周龄后与未染毒的健康雄性合笼传代,F1代分娩的仔鼠为F2代。同理,F2代合笼分娩后得到F3代。2.阴道开口时间和动情周期的监测:F3代仔鼠于出生21天(postnatal day 21,PND21)分笼,记录每窝雌雄比例及雌性阴道开口日期,并在生长至8周龄时行阴道细胞涂片,观察动情周期情况,连续监测10个动情周期。3.卵巢功能相关指标的测定:F3代雌性大鼠在出生后90天前后(postnatal day 90,PND90),再次监测动情周期,在动情间期进行称重、麻醉处死,采取腹腔静脉血,剥离子宫及两侧卵巢。一侧卵巢取出后称重,并用4%的多聚甲醛固定液保存固定;另一侧卵巢放入RNA store保存液中,-80℃保存。根据体重和脏器湿重,计算出子宫和卵巢的脏器系数。用ELISA试剂盒分别测定血清中促黄体生成素(lutenizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)浓度;卵巢H&E染色后连续切片用于组织形态学观察和各级卵泡的计数;TUNEL法检测卵泡颗粒细胞凋亡率;RT-PCR测定卵巢组织中人胰岛素样生长因子2(Insulin-like Growth Factor 2,IGF2)和H19 mRNA表达水平;Western blot法检测卵巢组织IGF2蛋白表达量。4.使用IMB SPSS Statistics 25.0软件对实验数据进行统计分析,单因素方差分析(one-way ANOVA)进行多组间均数的比较,LSD法进行组间两两比较,检验水准α=0.05。结果1.性别比例及脏器系数:孕期暴露TCDD对F3代SD大鼠雌雄性别比例的影响无统计学差异;与对照组相比,F3代100 ng/kg TCDD组卵巢重量和500 ng/kg TCDD组雌鼠卵巢脏器系数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.阴道开口时间及动情周期:与对照组相比,F3代成年雌性SD大鼠的阴道开口时间无统计学差异(P<0.05),对照组、100 ng/kg TCDD处理组和500 ng/kg TCDD 处理组分别为 34.65±0.57 天、34.0±0.68 天、32.8±1.01 天;动情周期时间长度并未出现统计学差异,但呈明显的紊乱状态,动情周期异常率分别为 20%、54%、65%。3.血清激素水平:与对照组相比,500 ng/kg TCDD组F3代成年雌性SD大鼠血清LH水平升高(P<0.05),FSH和E2水平变化不明显。4.H&E染色结果:与对照组相比,F3代SD大鼠TCDD处理组卵泡组织形态异常;500ng/kg TCDD组原始卵泡数明显减少(P<0.05),次级卵泡及黄体数目变化不明显;两个TCDD处理组卵巢颗粒细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。5.卵巢IGF2/H19表达量:与对照组相比,孕期暴露TCDD后,F3代成年SD大鼠卵巢内H19 mRNA表达水平上调,IGF2蛋白表达水平仅在500 ng/kg TCDD组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论孕期TCDD暴露可诱导卵泡发育和卵巢功能损伤效应,并且该效应可持续至F3代成年雌性大鼠,TCDD通过干扰卵巢类固醇激素分泌和诱导颗粒细胞凋亡,从而抑制卵泡发育和降低卵巢储备,其机制可能与卵巢内IGF2/H19信号通路有关。