我国作为世界养猪大国,养猪业生产给我国带来了很大的经济效益,但是,猪病一直制约着我国养猪业的发展。近年来,猪病呈现出两种及以上病原混合感染等现象,其导致的高发病率和高死亡率给我国养猪业造成了巨大的经济损失。在众多猪病中,猪瘟(Classical swine fever, CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome, PRRS)仍然是目前严重危害养猪业生产的两大重要疾病。CSF是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)引起的猪的一种以高热和出血为特征的高度接触性传染病。近年来,我国CSF的流行和发病特点发生了很大变化,以温和型、非典型CSF和母猪带毒综合征为主,临床表现也趋于复杂化。对于CSF的控制,我国主要采取疫苗免疫的措施,但疫苗免疫失败的现象却时有发生。CSF弱毒疫苗的大规模应用使得CSF野毒感染和疫苗接种的区分变得非常困难,因此,控制CSF流行,防止CSF感染蔓延的前提是对CSF野毒感染和弱毒疫苗接种的情况作出准确、快速的鉴别诊断。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和所有猪呼吸系统症状为典型特征的传染病。PRRS是危害养猪业的重要疾病,世界各国对PRRS的研究一直都在进行,但至今该病仍未得到完全有效的控制。2006年,我国爆发了高致病性PRRS,进一步加剧了PRRSV的复杂化,也给我国养猪业造成了重大的经济损失。对于PRRSV的感染,仅根.据临床症状和病理变化只能作出初步判断,很难确诊,因此,对PRRS快速、准确的诊断是控制PRRS流行的重要措施。本文针对CSF和PRRS开展了以下方面的研究：1.从GenBank中收集整理已经发布的54株CSFV毒株,经全基因组序列对比分析,在其5’NTR找到CSFV强毒和疫苗毒1个A碱基的差异性位点,根据这一区域设计了2条MGB探针和1对特异性的通用引物,用于鉴别CSFV强毒和疫苗毒。通过矩阵法优化反应体系和反应条件,建立了CSFV强弱毒鉴别的TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法,对该检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并建立标准曲线,将该方法应用于临床采集样品的检测,验证其与普通RT-PCR方法的符合率。结果表明,该方法可特异性的鉴别CSFV强毒和疫苗毒,对猪源的其他病毒均无扩增；强毒和弱毒探针的敏感性分别达到101 copies/μL和102 copies/μL;该方法具有较好的重复性；通过临床样品检测,与普通RT-PCR方法的符合率达到98.3%,具有较高的一致性。因此,该方法可用于临床CSFV野毒感染和弱毒疫苗接种的鉴别检测。2.从GenBank中收集整理美洲型PRRSV经典毒株和目前国内主要流行毒株,经全基因组序列比较分析,在其保守区ORF6区域设计了美洲型PRRSV通用的引物和TaqMan探针,用于美洲型PRRSV准确快速的检测。通过优化反应体系和条件,建立了PRRSV快速检测的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对该检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并建立标准曲线,将该方法应用于临床采集样品的检测,验证其与普通RT-PCR方法的符合率。结果表明,该方法可特异性的检测PRRSV,敏感性达到103 copies/μL,并且具有较好的重复性,通过临床样品检测,与普通RT-PCR方法的符合率达到95.7%,具有较高的一致性。因此,该方法可用于临床PRRSV准确快速的检测。本研究所建立的CSFV强、弱毒鉴别和PRRSV快速检测的TaqMan荧光定量RT-PCR方法可应用于临床检测,为CSF和PRRS的诊断和防控提供了一定的理论依据。