【摘 要】
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为探索利用基在工程方法提高油料作物种子中的α-生育酚水平,对结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)γ-TMT基因(BoTMT)的功能进行了研究.利用已构建的原核表达载
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为探索利用基在工程方法提高油料作物种子中的α-生育酚水平,对结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)γ-TMT基因(BoTMT)的功能进行了研究.利用已构建的原核表达载体pET-TMT,使BoTMT成熟蛋白编码区序列在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达.在37℃条件下诱导4h后BoTMT表达产物占菌体总蛋白质的22﹪.在28℃低温条件下可获得占总重组蛋白质45﹪的可溶性蛋白质.体外酶活性测定结果表明表达的蛋白质具有γ-生育酚甲基转移酶活性,能有效地催化γ-生育育甲基化生成α-生育酚,这为探索通过生物反应器生产α-生育酚提供了可能性.并用此特异表达蛋白,制备了BoTMT的兔抗血清.利用模式植物拟南芥研究了种子特异性表达载体p7S-TMTL在植物转化上的应用.运用真空法转化拟南芥,获得30株卡那霉素抗性转基因植株.PCR检测结果显示NTP Ⅱ基因和BoTMT基因共转化的植株占所获得的抗性植株的63﹪,初步表明外源基因已从农杆菌中转入拟南芥中.对获得的22株抗卡那霉素的再生大豆植株进行分子生物学检测.
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