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研究目的第一部分建立嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型。第二部分探讨嗜酸粒细胞激活对气道反应性的影响。研究方法第一部分无特定病原体(SPF)级雌性BALB/c小鼠80只,分为多黏菌素B组、生理盐水组、多黏菌素B+N-甲酰-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP)组、生理盐水+fMLP组。各组小鼠给予对应的点鼻液点鼻,共21 d。其中多黏菌素B组和生理盐水组分别以12 μ1多黏菌素B(5 mg/ml,溶于双蒸水中)和等量生理盐水点鼻,1次/d;多黏菌素B+fMLP组、生理盐水+fMLP组除以上对应处理外,分别于第21天点鼻后3 h再予10 μ1 fMLP(0.05 mg/ml,溶于乙酸中)点鼻1次。每组随机抽取10只小鼠测定气道反应性,以吸气阻力、呼气阻力和动态肺顺应性作为检测指标;测定时间多黏菌素B组、生理盐水组为末次点鼻后3 h,多黏菌素B+fMLP组、生理盐水+fMLP组为末次点鼻后24 h。末次点鼻后24 h内搜集各组余10只小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数及分类计数;肺组织行HE染色、变色酸2R染色观察气道周围炎症细胞浸润程度。第二部分SPF级雌性BALB/c小鼠80只,实验动物分组及模型构建同第一部分,每组20只。末次点鼻后24 h内通过心脏采血的方式获取小鼠血清,通过气管插管下支气管肺泡灌洗的方法获取各组小鼠BALF,并制作小鼠肺组织匀浆上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清、BALF、肺组织匀浆中嗜酸粒细胞过氧化物酶(EPX)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)水平。免疫组织化学染色检测各组小鼠肺组织中EG2的表达,结果以平均光密度(optical density,OD)值表示。透射电镜下观察低密度嗜酸粒细胞。研究结果第一部分多黏菌素B组BALF细胞总数显著高于生理盐水组[29.50(3.25)×104/ml比15.25(2.25)×104/ml,p<0.001],以嗜酸粒细胞最明显[11.76(6.02)×104/ml 比0.12(1.08)×104/ml,P<0.001],而两组肺泡巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞差异均无统计学意义。多黏菌素B+fMLP组细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著高于生理盐水+fMLP 组[分别为 27.00(3.50)×104/ml 比 14.00(2.50)×104/ml、10.17(6.15)×104/ml0.17(0.96)×104/ml,均P<0.001]。而多黏菌素B+fMLP组与多黏菌素B组细胞总数和分类计数差异均无统计学意义。多黏菌素B组和生理盐水组小鼠静注乙酰甲胆碱(Ach)的剂量-反应曲线比较,吸气阻力、呼气阻力和肺顺应性差异均无统计学意义。生理盐水+fMLP组与前两组相似,未见对倍增浓度乙酰甲胆碱的吸气阻力、呼气阻力增高,肺顺应性降低。但是随着注射Ach浓度的逐渐升高,多黏菌素B+fMLP组小鼠吸气阻力、呼气阻力均显著高于其他3组,肺顺应性均显著低于其他3组(均P<0.001)。肺组织切片HE染色、变色酸2R染色示多黏菌素B组和多黏菌素B+fMLP组小鼠炎症反应显著,大量炎症细胞浸润气道周围,浸润的炎症细胞以嗜酸粒细胞为主。而生理盐水组和生理盐水+fMLP组未见上述炎症反应。第二部分多黏菌素B组和生理盐水组小鼠血清、BALF、肺组织中EPX、ECP、ECF水平差异均无统计学意义。生理盐水+fMLP组血清、BALF、肺组织中EPX、ECP、ECF水平与前两组相似,无统计学差异。而与其他3组相比,多黏菌素B+fMLP组血清、BALF、肺组织中EPX、ECP和ECF水平均显著升高(均P<0.001)。免疫组化染色结果示生理盐水组、多黏菌素组、生理盐水+fMLP组和多黏菌素B+fMLP 组小鼠 OD 值分别为(0.0608±0.0211)、(0.1298±0.0268)、(0.0618±0.0201)和(0.1876±0.0329)。多黏菌素B+fMLP组小鼠表达较多EG2蛋白,显著高于其他3组(均P<0.001);多黏菌素组小鼠可见EG2表达,明显高于生理盐水组和生理盐水+fMLP组(均P<0.001);而生理盐水+fMLP组和生理盐水组小鼠均未见明显EG2蛋白表达,无显著差异(P=1.000)。肺组织电镜观察结果:生理盐水组、生理盐水+fMLP组未见嗜酸粒细胞浸润,多黏菌素B组、多黏菌素B+fMLP组见较多嗜酸粒细胞浸润;其中多黏菌素B组嗜酸粒细胞胞膜完整,颗粒密度一致,中心键清晰,偶见脱颗粒后形成的空泡而成为低密度嗜酸粒细胞;多黏菌素B+fMLP组见较多激活的低密度嗜酸粒细胞,细胞胞膜崩解,颗粒中心键脱失、密度减低,部分颗粒脱离细胞,胞质出现空泡。研究结论第一部分应用多黏菌素B点鼻可建立嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型第二部分嗜酸粒细胞激活对气道高反应性的发生有重要作用