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农药残留是危害食品安全的重要原因,其中有机磷农药是目前使用最广的一类农药,约占农药总使用量的70%,因此,对有机磷农药的检测是食品安全检测的重要内容。乐果是一种中等毒性的有机磷杀虫剂,但其在体内的氧化产物——氧乐果的毒性是乐果毒性的数十倍。目前用来检测乐果的方法主要是气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC),这些方法前处理步骤复杂,费时费力、设备昂贵,需要专业人员操作,适宜实验室操检测,不适宜大量样品和现场快速检测。 酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked immunoassay,ELISA)方法快速、灵敏、选择性好,适宜痕量物质的检测,同时还具有检测成本低,操作简便,安全可靠等优点。所以研制乐果的酶联免疫试剂盒具有重要的实际意义。本研究旨在解决检测乐果残留的试剂盒中的关键技术和科学问题。 根据乐果分子结构的特点及生物学特性,首先合成了乐果的半抗原,然后将半抗原与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成乐果的免疫原和包被抗原。 用合成的乐果免疫原免疫小鼠后获得乐果的多克隆抗体,用间接ELISA测定抗体的效价为1:256000,亲和常数为3.84×1010,酶标抗体的效价是1:4000。除了氧化乐果以外,它与其他主要的有机磷农药的交叉反应率都很低。通过直接和间接ELISA检测,确定乐果试剂盒的最佳包被介质是0.05mol/L,pH9.6的碳酸盐缓冲液、最佳包被温度和包被时间是4℃、12h,包被原、抗体和酶标二抗的最佳工作浓度分别0.8μg/mL、1:32000和1:4000,检测限为0.01mg/L,实验的回收率为95.61%,并且与GC有很好的符合率,符合率为99.46%。试剂盒的批内和批间变异系数均低于7.72%。这表明试剂盒有很好的稳定性。