基于光学适配体传感器的蔬菜中甲拌磷和水胺硫磷分析方法研究

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有机磷农药被广泛用于全球范围的虫害防治,但由于有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制,可能导致生物体的神经中枢疾病甚至死亡。全球多个国家和组织均颁布了相关的法律法规,对食品、饮用水和环境中的有机磷农药残留量进行严格监管。因此,对有机磷农药进行精准定量尤为重要。由于光学传感器具有灵敏度高、操作简便等特点,开发新型的有机磷农药光学传感器有利于促进食品安全状况改善和推动食品分析技术发展。主要研究内容如下:(1)构建了基于6-羧基荧光素(FAM)和金纳米粒子(AuNPs)的荧光适配体传感器,并应用于蔬菜样品中甲拌磷农药的测定:以FAM标记的甲拌磷适配体(FAM-适配体)作为荧光供体,以柠檬酸钠还原法制备的AuNPs作为荧光受体,构建了基于荧光共振能量转移(FRET)原理的适配体传感器。没有甲拌磷存在时,AuNPs对单链核酸适配体具有吸附作用,通过FRET猝灭FAM-适配体的荧光;而当甲拌磷存在时,适配体因与甲拌磷具有更强的亲和力而离开AuNPs表面,FRET受到抑制。通过对反应时间和AuNPs浓度的优化,检测体系的荧光强度与甲拌磷浓度在0.55 mg/L的范围内呈良好的线性,线性回归方程为y=53.90x+5.212(R2=0.9944),检测限为0.27 mg/L。本方法对甲拌磷具有良好的选择性。将其应用于大白菜、菠菜和生菜中甲拌磷的测定,加标回收率为97.5%111.2%,相对标准偏差(RSD)为6.5%11.3%。(2)构建了比色-磷光双模式适配体传感器,并应用于蔬菜样品中水胺硫磷农药的测定:水胺硫磷与适配体结合使适配体从AuNPs表面脱离,高盐环境中失去适配体保护的AuNPs发生聚集,溶液颜色由红变蓝,最大吸收峰发生红移,据此建立了水胺硫磷的比色测定方法。通过水热法和氨基硅氧烷水解聚合反应制备了氨基功能化的Zn2GeO4:Mn长余辉纳米棒(PLNRs-NH2)作为磷光供体,AuNPs作为磷光淬灭剂,由于内滤效应,分散的AuNPs对PLNRs-NH2的磷光有强烈的淬灭作用,而水胺硫磷诱导生成的聚集态AuNPs则对磷光淬灭较弱,据此建立了一种水胺硫磷的磷光测定方法。比色模式下,优化了适配体浓度、NaCl浓度和反应时间,在最优条件下,620 nm和520nm吸光度比值与水胺硫磷浓度在50500μg/L的范围内呈良好的线性,其线性回归方程为y=0.0022x+0.4299(R2=0.9935),检测限为7.1μg/L。磷光模式下,优化了PLNRs-NH2浓度和反应时间,537 nm磷光强度的变化值与水胺硫磷浓度在5160μg/L的范围内呈良好线性,线性回归方程为y=2.6479x+12.78(R2=0.9912),检测限为0.54μg/L。两种方法的检测限均优于GB 5009.20-2003方法。将本方法应用于大白菜、菠菜和生菜样品中水胺硫磷的测定,磷光模式下回收率为101.7%108.8%,RSD为1.0%5.7%。本论文开发的甲拌磷荧光适配体传感器,制备方法简单,样本前处理步骤少,对甲拌磷选择性好,灵敏度能够达到国家标准要求,可用于蔬菜样品中甲拌磷的测定。另外,建立了比色-磷光双模式适配体传感器,其中比色模式可直接通过肉眼观察对水胺硫磷进行半定量检测,磷光模式可消除背景干扰,提高信噪比和灵敏度,能够实现对蔬菜样品中水胺硫磷的高选择性和高灵敏测定,具有创新性。
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