论文部分内容阅读
目的:葛根素具有抗炎抗氧化的作用,可预防和治疗心血管疾病,但是具体机制目前尚不清楚。硫氧还蛋白(Trx)能够通过清除活性氧(ROS),调节细胞氧化应激,改善细胞的功能状态,被证明在治疗动脉粥样硬化中具有重要作用。本研究主要分析葛根素调节Trx1活性与在巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白(oxLDL)中的作用,并探究其分子机制。方法:1、对鼠源巨噬细胞(RAW264.7)进行体外培养,以50μg/m L的oxLDL或25μg/m L的Dil-oxLDL进行诱导并用不同浓度(10μM,50μM)的葛根素进行干预,流式细胞仪检测ROS含量和脂质吸收的情况,Western blot检测相关蛋白的表达情况。Trx1抑制剂PX-12与葛根素共处理细胞检测脂质吸收情况和ROS情况,Western blot检测相关蛋白的表达情况。2、将8周龄的雄性apo E-/-小鼠随机分成四个组,并进行以下处理:正常饮食组(ND)、高脂模型组(HFD)、葛根素组(100mg/kg)和PX-12组(葛根素100mg/kg+PX-12),处理结束后,取小鼠的腹腔巨噬细胞,Western blot检测Trx-1、清道夫受体及相关蛋白的表达。结果:1、葛根素上调巨噬细胞RAW264.7中Trx1表达,并影响与Trx1相关蛋白硫氧还蛋白还原酶(Trx R)和硫氧还蛋白互作蛋白(Txnip)的表达,调节巨噬细胞内的ROS。葛根素抑制了与oxLDL摄取相关的清道夫受体SR-A、LOX-1和CD36的表达,从而抑制了泡沫细胞的形成。PX-12抑制剂抑制Trx1的表达,抵消了葛根素对SR-A和LOX-1表达的下调,表明葛根素抑制oxLDL的摄取与调节Trx1的表达直接相关。葛根素上调Nrf2的表达与调节Trx1的表达呈正相关。2、体内实验结果显示,葛根素抑制了腹腔巨噬细胞内清道夫受体SR-A和LOX-1的表达,上调了Trx1和Trx R的表达,这一作用在加入抑制剂PX-12后受到抑制。结论:1、葛根素通过调节Trx1的表达,控制巨噬细胞内ROS。2、葛根素抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取并下调CD36、SR-A和LOX-1的表达。3、葛根素抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取与提高Trx1的表达相关。4、在巨噬细胞内,葛根素可能通过调节Nrf2对Trx1活性进行调控。