目的应用模拟体液(simulated body fluid, SBF)仿生矿化法制备羟磷灰石(hydroxyapatite,HA)-壳聚糖(chitosan,CHI)支架,并对支架的理化性能及自身的吸水性能、溶胀性能、降解性能进行评估,探讨矿化时间对支架结构的影响,并将成骨诱导后的脂肪基质干细胞接种到该支架上,通过观察细胞的增殖分化情况验证该支架的细胞相容性,进一步了解该支架对细胞生长的影响。方法先将壳聚糖粉末溶于2%乙酸溶液中,应用冷冻干燥法制备壳聚糖支架,NaOH乙醇-水溶液除酸,多聚磷酸钠交联;将该支架应用交替浸泡法进行预钙化,然后浸入模拟体液中进行矿化,控制矿化时间分别为7d、14d、21d,即为三组实验组,单纯壳聚糖支架为对照组,检测支架的大体形态、内部结构、孔径、孔隙率、物质组成、官能团组成、机械力学性能及吸水率、溶胀率、降解性能、热力学性质等属性,再将经过成骨诱导后的脂肪基质干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)接种到支架上,观察细胞-支架复合物粘附性、进行Live/Dead染色、免疫组织化学染色、茜素红染色分析、定量分析细胞增殖量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)舌性,确定支架的细胞相容性。结果1.壳聚糖支架在模拟体液中矿化14d时生成的矿化物形态与支架基质复合良好,在支架的孔壁上会形成条索状聚集样矿化物,矿化21d时矿化物呈团聚状、具有杂质碎片2.矿化14d,壳聚糖支架的矿化物分布均匀,在X射线衍射图像中能观察到31.79°、32.21°、32.90°三个HA特征峰,晶体组成符合HA特征。3.当矿化时间不足(矿化7d)时,壳聚糖支架的复合矿化物为碳酸化的羟基磷灰石,当矿化时间足够长(矿化14d以上)时,该支架的复合矿化物为磷酸化的羟基磷灰石。4.压缩／拉伸弹性模量随着矿化时间的延长而增强,在矿化21 d时其压缩／拉伸弹性模量分别达到79Kpa和86Kpa,与单纯壳聚糖支架组(对照组)的差异具有统计学意义(P<0.05)。5.当支架在降解液中刚开始降解时,其降解率升高的很快,随着降解时间的延长,支架的降解率趋于稳定。降解液的pH第一周内上升,第二周内下降,在随后的时间内缓慢上升直至稳定在7.54。6.矿化14d的细胞在扫面电子显微镜中相比于其他两组其粘附性最强、Dead/Live染色中成活性最好、CCK-8实验中细胞增殖量最多,与其他实验组及对照组的差异均有统计学意义(P<0.05)。7.工型胶原染色和茜素红染色显示三组实验组其细胞数量、工型胶原及钙离子分泌量随着细胞培养时间的延长而增多,并且矿化14d组支架接种的细胞工型胶原分泌情况最佳、钙化结节的数量最多。结论1.模拟体液仿生矿化法制备的支架在模拟体液中矿化14d时,其矿化物分布均匀,孔径大小相较于其他组趋于一致,矿化物晶体组成符合具有生物活性的羟基磷灰石特征,其理化性质达到最佳状态。2.随着矿化时间的延长,支架的吸水率增高、溶胀率降低,降解率和降解液的pH值趋于稳定。3.矿化14d组支架接种细胞后,其粘附性、成活性、碱性磷酸酶分泌活性良好;三组细胞数量、工型胶原分泌量、钙化结节数量均随着细胞培养时间的延长而增多,且达到本实验设定的细胞培养21天时最佳;矿化14d组支架在每个时间点均相比于其他两组为多,由此得出矿化14d组的细胞-支架复合物的相容性最强。4.模拟体液仿生矿化法是一种新型的组织工程方法,它不仅仅可作为体内动物实验的替代实验,还可用于制备HA-壳聚糖骨组织工程支架。