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[目的]
本研究旨在探索EGR3与放射诱导自噬的关系,并探究此关系对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。
[方法]
1.采用QRT-PCR法分别检测53例人鼻咽癌组织中EGR3mRNA、LC3mRNA的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法统计分析两者间的相关关系;再用免疫组织化学染色法分别检测27例人鼻咽癌组织中EGR3蛋白、LC3蛋白的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法统计分析两者间的相关关系。最后用QRT-PCR法、Westernblot技术相应地检测鼻咽癌细胞系EGR3、LC3mRNA和蛋白质的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法分别统计分析两者间的相关关系。
2.采用QRT-PCR法和Westernblot技术检测放射后EGR3mRNA和蛋白质的表达情况,并观察分析EGR3表达在不同时间点、不同放射剂量上的变化。
3.通过转染Si-EGR3干扰放射后EGR3的表达来探索放射后自噬的发生情况,结果经QRT-PCR法及Westernblot技术检测;用CQ/3-MA抑制放射后诱导的自噬来进一步探索放射后EGR3与自噬的关系,结果经QRT-PCR法及Westernblot技术检测。
4.采用CCK-8法、Westernblot技术、克隆形成实验探究放射后EGR3调控自噬对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。
[结果]
1.鼻咽癌组织和细胞系中EGR3表达与LC3II表达间存在正相关关系;
2.放射后,鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的EGR3被诱导表达,放射后随时间变化,与0h相比,EGR3mRNA在1h表达增高,1.5h达到最高,2h,4h逐渐下降;在蛋白中也证得相同的结果;放射后随剂量的增加,与0Gy相比,EGR3mRNA在2Gy、4Gy、6Gy剂量点上的表达逐渐升高,在蛋白中也证得相同的结果;
3.最适剂量照射后,鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2中的自噬被诱导,随时间延长,自噬的变化趋势与EGR3的表达变化趋势大致相同;在鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2中,下调EGR3能抑制放射诱导的自噬;最适放射剂量照射后,抑制自噬能降低EGR3的表达;
4.下调EGR3抑制放射诱导自噬能增加鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2对放射的敏感性:放射后48h实验组与对照组相比,实验组的细胞活性明显下降;而且实验组细胞内γ-H2AX蛋白较对照组明显增多;CNE-1和CNE-2的SER分别是1.046,1.644,两者均大于1,均表明有增加放射敏感性的效果。
[结论]
1.放射后,EGR3与自噬有关。
2.放射后,EGR3与自噬的关系是:下调EGR3能抑制放射诱导的自噬。
3.下调EGR3抑制放射诱导自噬能增加鼻咽癌细胞对放射的敏感性。
本研究旨在探索EGR3与放射诱导自噬的关系,并探究此关系对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。
[方法]
1.采用QRT-PCR法分别检测53例人鼻咽癌组织中EGR3mRNA、LC3mRNA的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法统计分析两者间的相关关系;再用免疫组织化学染色法分别检测27例人鼻咽癌组织中EGR3蛋白、LC3蛋白的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法统计分析两者间的相关关系。最后用QRT-PCR法、Westernblot技术相应地检测鼻咽癌细胞系EGR3、LC3mRNA和蛋白质的表达情况,并经Pearson’s相关系数分析法分别统计分析两者间的相关关系。
2.采用QRT-PCR法和Westernblot技术检测放射后EGR3mRNA和蛋白质的表达情况,并观察分析EGR3表达在不同时间点、不同放射剂量上的变化。
3.通过转染Si-EGR3干扰放射后EGR3的表达来探索放射后自噬的发生情况,结果经QRT-PCR法及Westernblot技术检测;用CQ/3-MA抑制放射后诱导的自噬来进一步探索放射后EGR3与自噬的关系,结果经QRT-PCR法及Westernblot技术检测。
4.采用CCK-8法、Westernblot技术、克隆形成实验探究放射后EGR3调控自噬对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。
[结果]
1.鼻咽癌组织和细胞系中EGR3表达与LC3II表达间存在正相关关系;
2.放射后,鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的EGR3被诱导表达,放射后随时间变化,与0h相比,EGR3mRNA在1h表达增高,1.5h达到最高,2h,4h逐渐下降;在蛋白中也证得相同的结果;放射后随剂量的增加,与0Gy相比,EGR3mRNA在2Gy、4Gy、6Gy剂量点上的表达逐渐升高,在蛋白中也证得相同的结果;
3.最适剂量照射后,鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2中的自噬被诱导,随时间延长,自噬的变化趋势与EGR3的表达变化趋势大致相同;在鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2中,下调EGR3能抑制放射诱导的自噬;最适放射剂量照射后,抑制自噬能降低EGR3的表达;
4.下调EGR3抑制放射诱导自噬能增加鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2对放射的敏感性:放射后48h实验组与对照组相比,实验组的细胞活性明显下降;而且实验组细胞内γ-H2AX蛋白较对照组明显增多;CNE-1和CNE-2的SER分别是1.046,1.644,两者均大于1,均表明有增加放射敏感性的效果。
[结论]
1.放射后,EGR3与自噬有关。
2.放射后,EGR3与自噬的关系是:下调EGR3能抑制放射诱导的自噬。
3.下调EGR3抑制放射诱导自噬能增加鼻咽癌细胞对放射的敏感性。