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研究表明,线粒体参与神经系统疾病的病理过程,与细胞死亡密切相关。结合实验室前期工作结果,本论文围绕乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲对大鼠脑线粒体的保护作用及其相关作用机制进行研究。
第一部分采用大鼠中脑动脉栓塞这一局灶性脑缺血模型,检测了石杉碱甲的神经保护作用以及在此模型中对线粒体功能的改善。大鼠右侧中脑动脉栓塞45分钟,再灌4小时即出现神经功能损伤,再灌24小时后可见明显的脑梗死区。再灌4小时虽未引起的明显的脑梗死,但线粒体功能已经受损,表现为线粒体呼吸链酶活力和α-酮戊二酸脱氢酶活力显著降低,线粒体活性氧自由基增多并出现线粒体肿胀现象。术前2小时灌胃给予大鼠石杉碱甲0.1mg/kg可以改善再灌后大鼠的神经功能、减小脑梗死体积,并减轻由缺血再灌导致的线粒体酶活力下降,减少活性氧自由基产生以及降低线粒体肿胀程度。而且石杉碱甲还可以改善由高钙导致的离体线粒体功能损伤,提高线粒体膜电位水平并减少活性氧自由基的生成。该部分研究结果提示石杉碱甲对线粒体的作用可能是石杉碱甲减轻脑缺血损伤的保护机制之一。
论文第二部分采用β-淀粉样肽(β-amyloidpeptide,Aβ)损伤离体大鼠脑线粒体模型探讨石杉碱甲对线粒体的保护作用,并就石杉碱甲对未经Aβ损伤的正常线粒体的影响进行了研究。Aβ与离体线粒体共孵育可直接导致大鼠脑线粒体功能损伤,表现为能量代谢受损,复合物IV活力降低,活性氧自由基增加且线粒体通透性发生转变。而石杉碱甲与线粒体预孵育可以部分对抗由Aβ导致的线粒体功能损伤。与Aβ损伤组相比,石杉碱甲可以通过保护线粒体复合物IV的活力、提高线粒体态3的氧呼吸速率、促进ATP生成来改善线粒体的能量代谢;其次石杉碱甲还可以减少活性氧自由基生成并减轻线粒体通透性变化,表现为增加线粒体膜电位、减轻线粒体肿胀程度并抑制细胞色素C释放。石杉碱甲与线粒体孵育,还可提高正常线粒体的ATP水平和α-酮戊二酸脱氢酶的活力,并降低正常线粒体在长时间孵育过程中出现的肿胀现象。实验结果提示石杉碱甲可能通过改善线粒体功能减轻Aβ损伤。
上述实验结果表明,石杉碱甲可以减轻由缺血再灌,高钙或Aβ导致的线粒体功能损伤,改善线粒体功能,且这一作用可能是部分通过石杉碱甲对线粒体的直接影响介导的。而石杉碱甲对线粒体的保护作用可能是石杉碱甲减轻脑缺血损伤和Aβ细胞毒性的机制之一。