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黏膜免疫系统是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线,而分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是黏膜免疫的主要效应因子。因此,建立快速检测黏膜组织中SIgA分泌量的方法,对正确评价动物黏膜免疫水平的高低有十分重要的意义。本研究以猪肠黏液为试验材料,采用改良硫酸铵盐析法从猪肠黏液中提取猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)粗提产物,SIgA粗提产物用High Q阴离子交换层析柱过柱,每毫升肠黏液获得纯化的猪SIgA 0.5mg。SDS-PAGE电泳检测显示,猪SIgA分子的重链分子量为57.1KD,轻链为28.9KD,J链为14.1KD。用纯化的猪SIgA免疫60日龄健康家兔,获得的兔抗猪高免血清经辛酸硫酸铵盐析法纯化兔抗猪(SIgA) IgG,纯化的兔抗猪(SIgA) IgG与猪SIgA经双向琼脂扩散,检测到兔抗猪(SIgA) IgG效价为1：24。用改良过碘酸钠氧化法对兔抗猪(SIgA) IgG进行HRP标记,获得了兔抗猪(SIgA) IgG-HRP酶标抗体,酶标抗体的酶标结合率为36.2%,克分子比为2.69。采用纯化的猪SIgA与制备的兔抗猪(SIgA)IgG-HRP酶标抗体,建立了检测猪SIgA的直接ELISA检测法。该检测法确定的最适反应条件为：样品蛋白包被浓度为10ug/ml,兔抗猪(SIgA)IgG-HRP酶标抗体的工作浓度为1：200、反应时间为60min。该检测方法的阴阳界限OD值为0.449,批内变异系数为6.63%,批间变异系数为8.99%。同时,建立了猪SIgA浓度标准曲线,标准曲线的线性范围为90-1400ng/ml。在猪的肠黏液中添加纯化的猪SIgA,当添加的浓度在100-400ng/ml时,猪SIgA浓度标准曲线的回收率为85.85%-133.88%,变异系数为13.12-17.67%。将36头15日龄健康仔猪,平均分为三组：免疫攻毒组、攻毒对照组和空白对照组。免疫攻毒组仔猪在21日龄和42日龄时免疫猪肺炎支原体(Mpn)灭活疫苗；免疫攻毒组和攻毒对照组仔猪均在61日龄时接种猪肺炎支原体活菌；空白对照组仔猪既不免疫也不攻毒。分别在仔猪15、35、56和75日龄时分离血清,并收集肺冲洗液与肠黏液。采用本实验室已建立的检测猪肺炎支原体IgG的间接ELISA检测法和建立的猪SIgA直接ELISA检测法,对各组仔猪血清样品中特异性IgG水平(SP值)、肺冲洗液和肠黏液中的SIgA含量进行检测。结果表明,各组仔猪血清样品中IgG SP值、肺冲洗液和肠黏液样品中SIgA浓度在试验初始无差异(15日龄)。一免后(35日龄),免疫攻毒组仔猪IgG SP值从初始值0.166上升到0.308,显著高于攻毒对照组与空白对照组(P<0.05)。此时各组仔猪肺冲洗液中的SIgA浓度之间无差异。二免后(56日龄),免疫攻毒组仔猪血清IgG SP值从0.308上升到0.503；肺冲洗液中SIgA浓度达153.89ng/ml,分别比攻毒对照组和空白对照组高31.81ng/ml和22.78ng/ml。攻毒后(75日龄),免疫攻毒组仔猪IgG SP值为0.480；肺冲洗液中SIgA浓度从153.89ng/ml上升至205.81ng/ml,显著高于攻毒对照组的147.56 ng/ml和空白对照组的124.37 ng/ml(P<0.05)。在整个试验期,各试验组仔猪肠黏液SIgA水平相对稳定,组间无明显差异,SIgA浓度维持在49.69-70.19ng/ml之间。