【摘 要】
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目的:研究胆管癌组织中14-3-3ζ表达与Treg细胞浸润的相关性,结合患者病理资料特征及生存期进一步探讨14-3-3ζ与Treg细胞对患者预后的影响,为深入研究胆管癌侵袭转移与肿瘤免疫之间的蛋白识别提供方向。方法:1.收集海南医学院附属医院肝胆外科2016年1月至2021年1月接受根治性切除并术后病理证实为胆管细胞癌的组织标本,运用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）
【基金项目】
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2020-01至2022-12,海南省基础与应用基础研究计划（自然科学领域）高层次人才项目,2019RC380,14-3-3ζ介导胆管癌上皮-间质细胞转化促进调节性T细胞浸润的机制研究；
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目的:研究胆管癌组织中14-3-3ζ表达与Treg细胞浸润的相关性,结合患者病理资料特征及生存期进一步探讨14-3-3ζ与Treg细胞对患者预后的影响,为深入研究胆管癌侵袭转移与肿瘤免疫之间的蛋白识别提供方向。方法:1.收集海南医学院附属医院肝胆外科2016年1月至2021年1月接受根治性切除并术后病理证实为胆管细胞癌的组织标本,运用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测胆管癌组织及配对癌旁组织（距肿瘤约2cm）14-3-3ζ、上皮-间质细胞转化标志物E-cadherin及Treg细胞表面标志物CD4、CD25和Foxp3的表达情况。2.通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）、免疫印迹试验（Western Blot,WB）进一步验证14-3-3ζ、上皮-间质细胞转化标志物E-cadherin及Treg细胞在胆管癌组织及配对癌旁组织中的表达水平。3.通过流式细胞技术（flow cytometry,FCM）进一步检测胆管癌组织与配对癌旁组织中Treg细胞的浸润情况。4.统计学分析14-3-3ζ、上皮-间质细胞转化标志物E-cadherin及Treg细胞表面标志物CD4、CD25和Foxp3的表达与临床病理资料的关系,相关性分析14-3-3ζ与Treg细胞浸润的相关性,进一步生存分析比较组间生存情况,探讨14-3-3ζ与Treg细胞浸润对患者预后的影响。结果:1.共纳入符合入组条件的胆管癌患者共74例;免疫组织化学结果显示14-3-3ζ、CD4、CD25及Foxp3在胆管癌组织中较其配对癌旁组织呈高表达,而E-cadherin则在胆管癌组织中呈低表达。2.qRT-PCR及Western Blot在基因及蛋白质水平进一步证实14-3-3ζ协同Treg细胞在胆管癌组织呈高表达,E-cadherin在胆管癌组织中呈低表达。3.流式细胞学显示胆管癌组织中Treg细胞（CD4+CD25+Foxp3+Treg）较癌旁组织浸润明显增多。4.统计学结果显示14-3-3ζ协同Treg细胞表面标志物CD4、CD25和Foxp3高表达与肿瘤TNM（III-IV期）分期晚（P＜0.001,P＜0.001,P=0.002和P＜0.001）、淋巴结转移（P=0.003、P=0.002、P=0.002和P=0.011）、肿瘤中低分化相关（P=0.005,P=0.004,P=0.001和P=0.003）。而E-cadherin低表达则和TNMⅢ-Ⅳ期（P＜0.001）、淋巴结转移（P=0.008）、肿瘤中低分化相关（P＜0.001）。运用Spearman相关性分析结果表明,胆管癌组织中14-3-3ζ高表达与CD4、CD25和Foxp3浸润密切相关（γ=0.554,P＜0.001）（γ=0.494,P＜0.001）（γ=0.434,P＜0.001）,而14-3-3ζ在癌组织中高表达则与E-cadherin的表达呈负相关（γ=-0.581,P＜0.001）。生存分析显示胆管癌组织中14-3-3ζ及CD4、CD25和Foxp3单一高表达或协同高表达预后均比低表达组差。结论:1.胆管癌组织中14-3-3ζ高表达与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞浸润呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关。2.胆管癌组织中Treg细胞较癌旁组织浸润增多。3.14-3-3ζ协同CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞浸润促进胆管癌早期侵袭转移,患者预后明显较差。4.Treg细胞浸润在胆管癌的进展过程中扮演着重要的角色,进一步阐明14-3-3ζ介导胆管癌细胞EMT诱导Treg细胞浸润准确而完整的调控机制,将为确切有效地治疗胆管癌提供指导和方向。
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