自SARS暴发后，研究人员在蝙蝠体内中发现大量遗传多样的SARS样冠状病毒(SL-CoV)，包括从中华菊头蝠样品中分离培养的两株病毒WIV1和WIV16，它们与SARS-CoV高度相似，并且能利用SARS-CoV的受体——血管紧张素转移酶2(ACE2)——直接感染人、猴、猪和蝙蝠的细胞，最终证实中华菊头蝠就是SARS-CoV的自然宿主。这些SL-CoV呈现了对人类公共健康的潜在危害。　　分离获得活病毒是研究病毒的致病性和评价潜在危害的关键。本研究结合两种主流的冠状病毒反向遗传学技术（体外拼接和BAC感染性克隆），建立了SL-CoVWIV1的反向遗传学系统。本研究利用体外拼接方法，采用BglⅠ限制酶将WIV1的基因组分割成8个cDNA片段，并在最后一片段3端加上PolyA序列;利用BAC感染性克隆方法，构建了一个类似的BAC(Bacterial Artificial Chromosome)载体，使载体上带有CMV启动子、HDV核酶和BGH转录终止信号;然后将8个cDNA片段通过一次连接反应插入BAC载体，经多重PCR和限制性酶切图谱鉴定，经济、高效地构建了WIV1的BAC感染性克隆。将BAC感染性克隆转染细胞便拯救了重组病毒。　　利用建立的反向遗传学技术，本研究选择了遗传多样的12株蝙蝠SL-CoV的S基因，将它们替换到WIV1的基因组骨架上，成功拯救了其中4株S基因嵌合重组病毒，包括SL-CoV Rs4231，Rs4874，Rs7327和RsSHC014。首先，本研究测定了这些嵌合病毒利用人、果子狸、蝙蝠ACE2入侵细胞的效率，发现除Rs4231不能利用蝙蝠ACE2入侵细胞有效复制，其他病毒对三种来源受体都能高效利用。然后，本研究测试了针对SARS-CoV RBD(Receptor Binding Domain)的抗体对WIV1和RsSHC014毒株的交叉中和作用，发现大部分抗体能中和WIV1，但不能中和RsSHC014，并意外发现一株单抗31H12对这两个毒株都有中和效应。　　前期本实验室分离培养的两株SL-CoV WIV1和WIV16都编码了一个新的阅读框（命名为ORFX）。本研究探索了ORFX的功能，发现ORFX是一个功能基因，表达为第7条亚基因组mRNA，但对病毒复制不是必须基因。初步研究发现ORFX可能参与调控宿主细胞的天然免疫反应，抑制干扰素的表达，激活NF-κB并上调其下游基因。