食管癌中癌基因c-myc对人有丝分裂检查点蛋白BubR1调控作用的研究

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目的:研究在食管癌中癌基因c-myc对人有丝分裂检查点蛋白BubR1的调控作用。方法:将BubR1的基因Bub1b启动子区域约500bp、1000bp、1500bp、2000bp的片段分别亚克隆于基于碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)表达的启动子报告质粒中。构建成功后,使用腺病毒在HEK-293细胞中过表达c-myc,分别将四种启动子报告质粒转染进入HEK-293细胞中,检测ALP的表达水平和活性;启动子报告质粒pSEAP2-Bub1b-P2000转染入食管癌细胞株ECA-109细胞中,检测c-myc抑制前后ECA-109细胞中ALP活性,采用PCR法和免疫印记方法检测c-myc抑制前后BubR1mRNA水平和蛋白水平的变化。结果:四种重组质粒经PCR及测序证明构建成功。过表达c-myc后可明显激活Bub1b启动子报告质粒pSEAP2-Bub1b-P2000的活性,在食管癌细胞中抑制c-myc表达前检测到激活的Bub1b启动子报告质粒活性,而抑制c-myc表达后报告质粒活性明显降低,同时检测到下调的BubR1mRNA和蛋白水平。结论:在食管癌细胞中,癌基因c-myc对BubR1的表达有正调控作用。
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