宫颈癌是全球女性生殖系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一。在发达国家中,宫颈鳞癌不仅是发病率最高的妇科生殖系统肿瘤,死亡率也是高居第二位,仅次于卵巢癌患者的死亡率。至今为止,宫颈癌转移的机制仍然未完全清楚。所以寻找有关影响宫颈癌侵袭和转移的分子标志物,研究其侵袭和转移机制,是目前宫颈癌研究方向的热点。Mfn2蛋白是由人类1号染色体短臂上Mfn2基因编码的线粒体蛋白,包含19个外显子,可以编码含有757个氨基酸的蛋白质。Mfn2分布于人类各组织器官细胞的线粒体中,包括女性生殖道,宫颈细胞等等,可以通过调控线粒体融合强度,维持和稳定机体局部微环境状态。根据不同类型的肿瘤及肿瘤病理分型,Mfn2扮演着不同的作用,可以促进或抑制恶性肿瘤的发生。而且Mfn2也与一些细胞的自我凋亡和自噬的相关信号通路有关。目前尚未发现关于Mfn2在宫颈恶性肿瘤中的表达及相关作用的研究。因此,本实验通过以下三部分对Mfn2在宫颈癌中表达及对其增殖,迁移和侵袭的作用及其潜在的分子机制进行初步探讨。第一部分检测Mfn2在宫颈癌组织和宫颈癌细胞中的表达情况目的:探讨Mfn2在宫颈癌组织和宫颈癌细胞株中的表达情况及与临床病理参数之间的相关性。方法:通过免疫组化和Western blotting检测Mfn2在宫颈癌组织和细胞株中的表达情况;通过Western blotting检测不同宫颈癌细胞株中Mfn2的表达情况。结果:宫颈癌组织中Mfn2的表达明显高于癌旁正常宫颈组织(P<0.05)。Mfn2在鳞状细胞癌和腺鳞癌之间的表达差别不明显,无统计学意义(P>0.05)。Mfn2的表达与年龄的关系不显着(P>0.05;表1)。Mfn2的表达与宫颈癌的分级相关,与分期无关(grades 2–3 vs 1,P<0.05;III/IV vs I/II,P>0.05)。结论:在宫颈腺癌中,Mfn2表达水平明显增高。高表达的Mfn2与宫颈癌的分级有关,与年龄和病理分期无关,Mfn2的高表达状态临床早期转移相关。第二部分探讨Mfn2对宫颈癌细胞株中增殖、迁移和侵袭的作用影响和机制目的:探讨Mfn2的表达对宫颈癌细胞株(Si Ha和C33a)增殖,迁移和侵袭的作用影响。方法:使用慢病毒LV3-Mfn2转染入宫颈癌细胞株中(Si Ha和C33a);使用CCK-8检测沉默Mfn2后宫颈癌细胞的增殖能力变化;划痕实验检测沉默Mfn2后宫颈癌细胞的迁移能力变化;Transwell实验检测沉默Mfn2后宫颈癌细胞的侵袭能力变化。结果:转染LV3-Mfn2慢病毒过后,荧光显微镜线观察Si Ha和C33a的转染效率较高,达到90%以上。转染LV3-Mfn2慢病毒过后,CCK-8实验和克隆形成实验表明宫颈癌细胞株增殖能力减弱。我们用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,LV3-Mfn2组细胞与LV-NC组细胞相比表现出增殖能力的降低。LV3-Mfn2组细胞与LV-NC组细胞相比表现出迁移和侵袭能力的降低。结论:沉默Mfn2后可以抑制宫颈癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力,从而抑制宫颈癌的转移行为。第三部分探讨Mfn2调控宫颈癌细胞生物学行为的分子信号机制及体内成瘤能力的研究目的:探讨Mfn2调控宫颈癌细胞生物学行为的信号通路机制及体内成瘤能力的研究。方法:鬼笔环肽染色检测沉默Mfn2后细胞骨架的形态及数量变化;Western blotting检测ROCK家族蛋白Rho A和下游ROCK激酶的表达;Western blotting检测沉默Mfn2后IL-6/STAT3信号通路中关键蛋白的改变;裸鼠体内成瘤实验检测沉默Mfn2后宫颈癌细胞成瘤能力的变化。结果:沉默Mfn2后鬼笔环肽染色显示细胞骨架的数量减少,细胞伪足减少,运动能力减弱;沉默Mfn2后ROCK家族Rho A和下游ROCK激酶表达降低(P<0.05)。沉默Mfn2过后,IL-6/STAT3信号通路的关键蛋白(IL-6R和p-STAT3)表达水平相应降低,而IL-6R表达增加后,Mfn2和p-STAT3表达增加。相比对照组,沉默Mfn2后宫颈癌细胞株的裸鼠体内成瘤能力减弱(P<0.05);裸鼠肿瘤组织中Mfn2,p-STAT3及Rho家族蛋白表达降低。结论:Mfn2可以通过IL-6/STAT3调控宫颈癌细胞的细胞骨架,从而调节宫颈癌侵袭和迁移能力。沉默Mfn2的表达对宫颈癌细胞的成瘤能力具有抑制作用。