论文部分内容阅读
【目的】探讨SREBP1通过Wnt/β-catenin信号通路参与食管鳞癌细胞增殖和侵袭转移的相关机制【方法】（1）基于Oncomine中两个独立数据库分析了SREBP1在食管鳞癌组织和癌旁正常组织中的表达水平。H&E染色及免疫组化分析食管鳞癌患者癌组织与癌旁正常组织SREBP1表达的差异并结合临床病理特征进行统计分析。通过PCR和Western blot检测SREBP1在癌组织和癌旁正常组织中的表达。（2）CCK8法检测SREBP1对食管鳞癌细胞增殖能力的影响。Western blot和免疫荧光检测食管鳞癌细胞中SREBP1表达改变对Ki-67表达的影响。通过Western blot、免疫荧光、PCR检测食管鳞癌细胞中SREBP1表达改变对EMT相关蛋白表达和EMT相关转录因子形成的影响。（3）通过PCR和ELISA检测食管鳞癌细胞中SREBP1表达对VEGF-A、VEGFC、MMP2、MMP9表达的影响;划痕实验和TranswellTM实验检测SREBP1表达改变对食管癌细胞系迁移、浸润能力的影响;Western blot法检测食管鳞癌细胞中SREBP1表达对Wnt/β-catenin信号通路活化的影响;结合Wnt/β-catenin信号抑制剂ICG-001,通过Western blot验证食管鳞癌细胞中SREBP1表达变化对Wnt/β-catenin信号通路调控作用。（4）Western blot检测食管鳞癌细胞中SREBP1表达改变对SCD1表达的影响以及SCD1表达改变对Wnt/β-catenin信号通路活化的影响。结合SREBP1抑制剂Fatostatin（10μM）,Western blot检测食管鳞癌细胞中SREBP1和SCD1的核易位以及Wnt/β-catenin信号通路活化情况。CCK8和ELISA分别检测用Fastostatin处理后,KYSE-150细胞系的增殖能力和上清液中VEGF-A和MMP9的外泌量。（5）通过免疫组化分析裸鼠移植瘤模型中sh NC和sh SREBP1组之间异种移植肿瘤中SREBP1,p-GSK-3β,β-catenin,SCD1,Ki-67,MMP9和VEGF-C的表达变化。H&E染色分析统计裸鼠转移瘤模型中sh NC和sh SREBP1组中肺转移瘤数目。【结果】（1）在食管鳞癌组织和细胞系中SREBP1表达升高。生信分析和免疫组化显示,SREBP1在食管鳞癌瘤体内表达高于癌旁的正常组织。食管鳞癌组织中SREBP1的阳性程度与肿瘤分化、淋巴结转移和Ki67表达水平呈正相关。与癌旁正常组织相比,SREBP1在ESCC组织中的转录水平和翻译水平显著增加。（2）SREBP1促进食管鳞癌细胞的增殖和EMT发生。抑制SREBP1表达后食管鳞癌细胞增殖能力降低,E-cadherin表达增加,N-cadherin、Vimentin表达下降,EMT相关转录因子Slug、Snail1表达水平降低;而过表达SREBP1则相反。（3）下调SREBP1通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖和转移。敲低SREBP1可以显著降低ECA-109细胞中MMP9、VEGF-A和VEGF-C的表达,而上调SREBP1的表达可明显增强。同时无论上调或下调SREBP1,对食管鳞癌细胞中MMP2表达无显著影响。抑制SREBP1可以使食管鳞癌细胞侵袭转移能力增强,上调SREBP1则相反。在食管鳞癌中,SREBP1对Wnt/β-catenin通路活化有显著影响;食管鳞癌细胞中SREBP1的表达不受ICG-001处理的影响。（4）SREBP1主要通过SCD1激活Wnt/β-catenin途径。过表达SREBP1的食管鳞癌细胞中SCD1显着升高,而干扰SREBP1则相反。无论SREBP1是否过表达,SCD1敲低均抑制β-catenin进入细胞核,而对SREBP1的表达无影响。Fatostatin（SREBP1抑制剂）不仅减少了SREBP1和SCD1在细胞核中的表达,而且阻止了细胞质中β-catenin的核易位。（5）体内实验证实SREBP1参与ESCC增殖与转移。与对照组相比,靶向敲除SREBP1的移植瘤中SREBP1,β-catenin,MMP9,VEGF-C和Ki67的表达受到明显抑制,移植瘤的肿瘤体积明显小于对照组。与对照组相比,SREBP1的下调抑制了肺内转移灶的数量。【结论】SREBP1在ESCC肿瘤组织和细胞中的上调。SREBP1在ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭中起着关键作用,并引起EMT的触发以及VEGF和MMP的上调。此外,SREBP1通过上调SCD1激活Wnt/β-catenin信号通路进而促进食管鳞癌细胞增殖、侵袭及转移。