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恶性黑素瘤是一种恶性程度极高的肿瘤，预后差，极易发生侵袭转移。其生长旺盛、分裂增殖速度快，并拥有肿瘤的典型特征-能量代谢异常，这其中包括氧化磷酸化(oxidative phosphorylation，OXPHOS)的改变。OXPHOS主要是由线粒体电子呼吸链复合物完成，是细胞高效的产能过程，与肿瘤生长速度相关，并在转移性恶性黑素瘤细胞中水平升高。 CD147/Basigin(BSG)是一种高糖基化的跨膜糖蛋白，在包括肿瘤细胞在内的多种代谢活跃的细胞膜上高表达，可作为分子伴侣与其他一系列蛋白结合，形成复合物在炎症、肿瘤等过程中发挥重要功能。既往研究表明，CD147与恶性黑素瘤的增殖、侵袭、血管生成、转移等过程密切相关，而肿瘤的侵袭转移离不开能量代谢，用siRNA技术干扰CD147的表达可通过下调细胞的糖酵解从而抑制黑素瘤的恶性行为。然而，CD147与OXPHOS的关系尚未明了。因此，本研究旨在明确CD147是否可与恶性黑素瘤线粒体上相关蛋白结合而影响线粒体相关功能，进而调节OXPHOS水平，参与肿瘤能量代谢。 研究目的: 1.研究CD147在原位和转移性恶性黑素瘤组织中的表达位置; 2.探讨CD147在恶性黑素瘤细胞线粒体上的表达，进而找出其在线粒体上可能的相关结合蛋白; 3.探讨CD147是否与线粒体上相关蛋白结合而影响恶性黑素瘤细胞线粒体复合物Ⅰ的活性; 4.探讨CD147是否通过线粒体通路对恶性黑素瘤细胞活性和凋亡产生影响。 研究方法: 1.利用免疫组化方法检测10例原位恶性黑素瘤和10例转移性恶性黑素瘤中CD147的表达，分析其表达位置的差异; 2.分离A375细胞的线粒体和胞浆蛋白，利用western blot检测CD147在A375细胞线粒体上的表达; 3.用细胞免疫荧光检测方法明确CD147在A375细胞线粒体上的定位; 4.采用酵母双杂交的方法找出CD147在线粒体上的可能结合蛋白—NDUFS6，构建了CD147-Myc和Flag-NDUFS6的质粒，并在HEK293T细胞中共转，利用免疫共沉淀和免疫荧光共聚焦法验证两者之间的结合; 5.构建了分别敲除CD147胞外Ig样结构域Ⅰ(Ig domainⅠ，delete34-89)、胞外Ig样结构域Ⅱ(Ig domainⅡ，delete105-199)、跨膜段(Transmembrane domain,delete207-230)，胞内段(Cytoplasmicdomain，delete231-end)及同时敲除跨膜段和胞内段（Transmembraneand Cytoplasmic domains， delete207-end）的质粒，均带有Myc-tag，利用免疫共沉淀法明确CD147与NDUFS6的结合区段，并用细胞免疫荧光共聚焦法进一步验证; 6.利用siRNA技术干扰A375细胞中CD147的表达，用免疫印迹法验证转染的有效性，将正常对照(normal control)和干扰CD147的A375细胞分别命名为A375-siNC和A375-siCD147(或A375-siBSG); 7.利用Dipstick试剂盒检测A375-siNC和A375-siCD147细胞中线粒体复合物Ⅰ的活性; 8.用线粒体损伤药物黄连素处理A375-siNC和A375-siCD147细胞，用Alamar Blue法检测细胞活性; 9.用黄连素处理A375-siNC和A375-siCD147细胞，检测凋亡水平（免疫印迹法检测Cleaved-PARP表达）; 10.在A375-siNC和A375-siCD147细胞中过表达Bcl-2，用黄连素处理细胞，检测凋亡水平（免疫印迹法检测Cleaved-PARP表达）。 研究结果: 1.在20例标本中，黑素瘤细胞膜上均有不同程度的CD147的表达，而在2例原位癌和8例转移癌中出现明显的胞浆分布; 2.CD147在A375细胞的线粒体中有高表达，并与ATP5B在线粒体上存在共定位; 3.酵母双杂交筛选出NDUFS6可能作为CD147潜在的结合蛋白。 4.用免疫共沉淀方法检测到CD147与NDUFS6存在相互作用，免疫荧光共聚焦检测到二者在A375细胞中有共定位; 5.用Flag抗体沉淀含不同缺失区段的CD147-Myc，检测到敲除了CD147胞外Ig样结构域Ⅰ和敲除跨膜段后与NDUFS6无结合;提示这两个区段可能为二者结合部位，免疫荧光共聚焦共定位结果与之一致; 6.CD147siRNA的2个不同干扰位点分别下调了A375细胞线粒体复合物Ⅰ的活性25.1％和27.8％(P＜0.05); 7.CD147siRNA显著降低了黄连素处理后的A375细胞活性(P＜0.01); 8.CD147siRNA上调了黄连素引起的A375细胞中Cleaved-PARP的表达水平，在A375-siNC和A375-siCD147细胞中加入外源性的Bcl-2可保护黄连素引起的凋亡。 结论: 1.CD147在转移的恶性黑素瘤中有向胞浆转位的趋势; 2.CD147在恶性黑素瘤A375细胞线粒体上与NDUFS6相互作用，影响线粒体复合物Ⅰ的活性，进而可能参与恶性黑素瘤能量代谢的OXPHOS过程; 3.CD147可能通过线粒体途径增强A375细胞活性，减少其凋亡。