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目的:目前,癌症依然是困扰人类健康的重大疾病。而在与癌症相关的死亡病例中,肺癌是主要的致死性癌症之一,其中非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)占据肺癌的85%左右。传统的治疗手段主要包括外科手术切除、化疗及放疗。由于肺癌早期症状不明显,大多数确诊时已处于晚期阶段,治疗后五年存活率低且预后差。因此,研究新型的肿瘤治疗策略十分必要。其中,干细胞治疗备受关注。间充质干细胞(Mesenchymal Stem cells,MSCs)由于具有免疫原性低、靶向肿瘤等特性成为了干细胞疗法中最主要的种子细胞。研究表明,MSCs能通过分泌多种细胞活性因子,显著地抑制包括黑色素瘤、肝癌及乳腺癌在内的多种肿瘤的生长。由于NSCLC的组织类型的异质性及其发病分子机制的多样性,现有报道中MSCs对NSCLC的作用不一致,且对其分子机制的探究也不明确。鉴于此,本论文深入探究了MSCs对不同组织类型NSCLC细胞的增殖和转移的影响,并进一步阐述了其基于MAPK/eIF4E信号通路的分子机制。 方法:本论文采用了不同组织类型的NSCLC细胞系,包括肺腺癌来源的A549细胞系,肺大细胞癌来源的H460细胞系和肺鳞癌来源的MES细胞系。首先,利用Transwell迁移实验探究了MSCs对不同组织来源的NSCLC细胞的归巢性;其次,通过MTT实验探究了MSCs对不同组织来源的NSCLC细胞增殖能力的影响;然后,通过划痕实验分析了MSCs对不同组织来源的NSCLC细胞迁移能力的影响;最后,通过基因芯片表达谱检测及WB检测探究了MSCs影响NSCLC细胞增殖和迁移的分子机制。 结果:迁移实验结果表明,MSCs向不同组织类型的NSCLC细胞的迁移能力显著大于向对照组的迁移能力(p<0.001),其中向A549细胞的迁移数(118±17.06)最多,其次是向MES细胞(93±4.24)和H460细胞(64.25±4.03)。MTT实验结果表明,当MSCs与不同组织来源的NSCLC细胞共培养时,MSCs对NSCLC细胞增殖能力具有明显的抑制作用,且抑制作用的大小随着MSCs比例的增大而增大,以2∶1(MSCs∶NSCLC)的细胞比例共培养48h后,MSCs对NSCLC细胞增殖能力的抑制率达到最大,且MSCs对H460细胞增殖能力的抑制率(30.67%±1.30)高于对A549细胞(26.99%±3.44)和对MES细胞(25.35%±0.39)的抑制率;当利用MSCs的条件培养基(Conditional Medium,CM)培养NSCLC细胞时,MSCs CM对NSCLC细胞同样表现出显著的抑制效应,且抑制率的大小随着CM的浓度增大而增大。用100%MSCs CM培养48h后,对不同组织来源的NSCLC细胞表现出最大抑制效应,同样,对H460增殖能力的抑制率(63.08%±1.38)大于对A549细胞(39.99%±6.05)和MES细胞(26.03%±2.82)的抑制率。Western blot实验结果表明,MSCs CM培养基培养NSCLC细胞48h后,分别与细胞增殖、抗凋亡及细胞迁移相关的蛋白PCNA、Bcl2、Akt的表达均显著下调。此外,p44/p42MAPK及其磷酸化水平、蛋白质翻译起始因子eIF4E及其磷酸化水平以及MNK1的磷酸化水平均显著下调。基因芯片表达谱分析检测发现MSCs大量表达血管内皮生长因子(Vascular epithelial Growth Factor,VEGF),当用人源VEGF165蛋白中和抗体中和CM中MSCs分泌的VEGF后,在分子水平上,MSCs CM对NSCLC细胞相关蛋白的下调作用表现出了一定的阻滞作用,而在细胞水平上,MSCs CM对NSCLC细胞增殖能力和迁移能力的抑制作用也减弱,同时向正常培养基中添加人源VEGF165蛋白能模拟MSCs CM对NSCLC的抑制效应。 结论:本论文证明了骨髓MSCs具有向NSCLC细胞归巢的能力,且对NSCLC细胞增殖能力及迁移能力均具有显著的抑制作用,该抑制作用的发挥不依赖于细胞间的直接作用,可通过骨髓MSCs分泌的细胞因子以旁分泌的作用发挥效应。MSCs分泌的VEGF-A作为其中的一个效应分子,通过抑制MAPK/eIF4E信号通路,下调与细胞增殖、迁移及抗凋亡相关靶基因的表达,从而发挥肿瘤抑制效应。