7烟碱型受体调控胆管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的观察研究

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:changkaiaini
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目的:通过观察尼古丁及α-BTX刺激后的胆管癌细胞增殖及侵袭能力的差异,初步探讨a7烟碱型乙酰胆碱受体对胆管癌细胞增殖及侵袭的调控作用,同时对其相关机制进行初步探讨。方法:1.应用MTT法检测α7烟碱型受体激动剂尼古丁及其阻断剂α-BTX对胆管癌细胞QBC939增殖的影响;2.应用transwell侵袭模型检测尼古丁及α-BTX对QBC939细胞侵袭能力的影响;3.观察尼古丁及α-BTX预处理胆管癌细胞经5-fu处理后细胞形态及克隆形成率变化;4.应用RT-PCR检测经尼古丁及α-BTX处理后胆管癌细胞中抑癌基因PTEN表达情况;结果:经α7烟碱型受体激动剂尼古丁处理后,在48h、72h时随尼古丁刺激浓度的升高,其促增殖能力也越强(48h:F=80.86,P<0.05:72h:F=61.49P<0.05)。且随抑制作用呈时间依赖性,24h时尼古丁促增殖作用无显著差异(F=0.49,P>0.05),而48h及72h的促增殖作用较显著,且48h>72h(P<0.05)。同时加入α7AchR激动剂尼古丁后穿过基质胶的细胞数明显增加,尼古丁组与其他各试验组差异有统计学意义(P<0.05)。而α7烟碱型受体阻断剂α-BTX可明显抑制上述尼古丁的促进效应。经5-fu处理后,同时,应用化疗药物5-fu处理后,经尼古丁预处理胆管癌细胞凋亡形态不显著,尼古丁刺激组(终浓度分别为10-3g/L、104g/L、10-5g/L)细胞存活率分别为128%、124%、118%,细胞存活率较阴性对照组明显升高,并呈一定的浓度依赖性,而α银环蛇毒素刺激组(2ug/mL)、尼古丁α银环蛇毒素联合组细胞存活率分别为92%、94%、93%、92%。尼古丁刺激组(6.2±0.40)的克隆形成能力明显高于α银环蛇毒素刺激组(3.2±0.20)、联合组(3.2±0.20)及对照组(3.4±0.33)。各实验组PTENmRNA表达量分别为:尼古丁组:0.24±0.055,单用α-BTX组:0.6±0.062,联合刺激组:0.66±0.050,对照组:0.62±0.03,四组差异有统计学意义(F=43.377,p<0.05),尼古丁与单用α-BTX组、联合应用组及对照组差异均有统计学意义(p<0.05),而单用α-BTX组与联合应用组(p=0.211>0.05),α-BTX组与对照组(p=0.644>0.05)及联合应用组与对照组(p=0.405>0.05)之间相比无显著差异。结论:尼古丁可明显增强胆管癌细胞的增殖及侵袭能力,并且可明显降低细胞的化疗敏感性,其可能是通过α7烟碱型受体发挥上述促肿瘤效应,抗凋亡效应可能与抑癌基因PTENmRNA表达密切相关。
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