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目的：观察胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophicfactor，GDNF)对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。 方法：取成年Wistar大鼠脑组织体外分离神经干细胞：①将取得的神经干细胞分为5组:G1组:空白对照组;G2组:PBS组;G3组:GDNF组;G4组:EGF+bFGF组;G5组:EGF+bFGF+GDNF组，将神经干细胞按上述分组体外培养。②在培养的第0、6、13、20天分别进行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)处理，过夜，免疫荧光染色，在共聚焦显微镜下观察BrdU阳性的细胞，并进行计数，然后计算各组BrdU阳性细胞数，各自取平均值，根据检测结果绘制各组细胞增殖曲线图。③在培养的第1、7、14、21天应用免疫荧光检验法检测增殖的细胞中巢蛋白(Nestin)的表达，记录免疫荧光强度，取其平均值，鉴定神经干细胞属性。④取培养第1、7、14、21天的神经干细胞进行诱导分化，诱导分化后3天应用神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specificenolase,NSE)抗体、胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein, GFAP）抗体及环核苷酸磷酸二酯酶(cyclic nucleotide phosphodiesterase，CNP)抗体行免疫荧光染色，在共聚焦显微镜下动态观察细胞生长及形态分化情况，从而鉴定所分化细胞种类，明确神经干细胞多向分化潜能。 结果：①经BrdU处理的神经干细胞，在共聚焦显微镜下观察BrdU阳性细胞数，并以均数±标准差表示，培养20天时的数值分别为:G1组:33.8±3.35;G2组:34.96±4.23; G3组:35.44±4.09;G4组:78.29±5.81;G5组:134.16±3.90;行t检验进行统计学分析，G4-G5组与G1组及G2组相比，p＜0.05，差异有统计学意义;G1组、G2组与G3组相比，p＞0.05，差异无统计学意义;G4组与G5组间比较，p＞0.05，差异无统计学意义。②行免疫荧光细胞化学染色检测Nestin的表达情况，应用共聚焦显微镜观察细胞，同时记录免疫荧光强度值，空白对照组、PBS组及单独GDNF组相比较，P＞0.05，差异无统计学意义;空白对照组、PBS组及单独GDNF组分别与EGF+bFGF组及EGF+bFGF+GDNF组相比较，P＜0.05，差异有统计学意义;EGF+bFGF组与EGF+bFGF+GDNF组相比较，P＜0.05，差异有统计学意义。③对神经干细胞诱导分化3天后，进行免疫荧光细胞染色，在共聚焦显微镜下观察到进行了标记的NSE抗体、GFAP抗体及CNP抗体的阳性表现，说明经过诱导分化后的细胞内存在能与NSE抗体、GFAP抗体及CNP抗体相结合的抗原，以上三种抗体相对的抗原称为神经干细胞特异性抗原。 结论：①从成年wistar大鼠海马区分离出神经干细胞，GDNF能促进神经干细胞增殖。②经GDNF培养而增殖的细胞具有神经干细胞属性。③经GDNF培养、增殖及诱导分化的神经干细胞具有神经干细胞生物学特性。