【摘 要】
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我们前期获得了三型(野生型、分泌型、跨膜型)TNF-α(tumor necrosis factor alpha)转基因鼠,由于每一型转基因鼠均有不同的多个Founder。因此,必须筛选出每一型TNF-α转基因
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我们前期获得了三型(野生型、分泌型、跨膜型)TNF-α(tumor necrosis factor alpha)转基因鼠,由于每一型转基因鼠均有不同的多个Founder。因此,必须筛选出每一型TNF-α转基因鼠在肠上皮细胞中TNF-α表达最高的Founder子代鼠。利用筛选出的三型转基因Founder子代鼠,建立DSS诱导的急性肠炎模型,研究两型TNF-α在炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)中的作用。主要的研究结果有:1.采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定三型TNF-α转基因鼠的目的基因,将肠道上皮特异性表达cre的villin-cre转基因鼠分别与这三型TNF-α转基因鼠杂交,成功鉴定出三型TNF-α双阳性转基因鼠;2.他莫昔芬(Tamoxifen)诱导三型TNF-α转基因双阳性鼠的肠上皮细胞条件性表达TNF-α,采用荧光定量PCR、流式细胞术和免疫组织化学技术筛选出三型TNF-α转基因双阳性鼠中TNF-α在肠上皮细胞表达最高的Founder子代鼠;3.利用筛选出的三型TNF-α转基因双阳性鼠建立由DSS诱导的小鼠急性肠炎模型,通过观察模型鼠的表型变化和流式检测结果发现sTNF-α主要发挥促炎作用,tmTNF-α主要发挥抑炎作用;通过免疫组织化学检测发现tmTNF-α在炎症局部主要通过抑制M1型巨噬细胞的浸润发挥抑炎作用。综上所述,Tamoxifen可诱导三型TNF-α转基因双阳性鼠在肠上皮细胞条件性表达TNF-α,在DSS诱导的急性肠炎模型中,tmTNF-α主要起保护作用。
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