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研究背景卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,其中85-90%是上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）。由于卵巢位于盆腔深处,早期症状不明显,超过70%的患者确诊时已是晚期,手术联合化疗是其主要的治疗手段,但60-70%中晚期卵巢癌患者死于肿瘤复发、转移以及化疗耐药,5年生存率远低于其他癌症,仅为20-30%。因此,深入探讨卵巢癌发生发展及转移、耐药等机制,对改善卵巢癌患者的预后具有重要意义。外核苷三磷酸二磷酸水解酶5（ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 5,ENTPD5）介导细胞内核廿酸的分解代谢和内质网中蛋白质的N-糖基化。众多研究表明:ENTPD5在多种恶性肿瘤中参与发挥重要作用。ENTPD5表达可以促进胰腺癌细胞的增殖,而抑制ENTPD5的表达则可降低乳腺癌细胞侵袭以及肺部转移的能力。在前列腺癌中,ENTPD5的表达越高,前列腺癌病变程度就越高,且过表达ENTPD5可通过蛋白激酶Ca介导调节Bcl-2稳态,增加前列腺癌对顺铂的耐药性。ENTPD5在癌症的增殖、迁移以及耐药中发挥关键作用,有可能成为癌症早期诊断或监测疗效的靶标分子。ENTPD5是否参与EOC的发生、发展及耐药呢?在前期研究中,通过生信分析我们发现ENTPD5的表达与EOC患者生存率呈负相关,且初步实验研究提示ENTPD5在EOC中的表达明显高于正常卵巢组织。本研究将在前期基础上,进一步探讨ENTPD5与EOC的增殖、迁移和耐药相关性及其初步分子机制,对ENTPD5及其靶分子能否成为铂类继发耐药的卵巢癌诊断和治疗的新靶点,具有重要的临床意义。目的研究ENTPD5对EOC增殖、迁移和顺铂耐药的影响,初步探讨ENTPD5调控EOC细胞功能的潜在机制。方法1.收集2018年1月-2021年6月南方医科大学南方医院卵巢癌手术切除的EOC组织标本82例和因其他疾病切除的正常输卵管（Fallopian tube,FT）组织标本6例,通过RT-qPCR、WB和免疫组化技术检测ENTPD5在EOC组织与FT组织中的表达水平,通过卡方检验统计分析ENTPD5的表达与临床病理特征的相关性。2.构建ENTPD5敲低或过表达的EOC细胞OVCAR8和SKOV3,并以转染空载慢病毒作为对照组,通过平板克隆形成实验、3D细胞培养、划痕愈合实验、流式细胞术,观察ENTPD5对EOC增殖、迁移、周期和凋亡的影响。通过RT-qPCR和WB检测敲低ENTPD5对GRP78、p-eIF-2α、CHOP基因表达的影响。3.通过免疫组化分析ENTPD5在铂治疗敏感复发和铂治疗耐药复发的EOC组织中的表达水平,顺铂浓度梯度递增法建立卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,RT-qPCR和WB检测顺铂对SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激的影响、ENTPD5的表达水平以及顺铂对ENTPD5表达的影响,CCK8和流式细胞术检测敲低ENTPD5对卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的影响。通过WB检测敲低ENTPD5对GRP78表达的影响。结果1.ENTPD5在EOC组织中高表达1.1 ENTPD5在EOC组织中mRNA表达水平（2.18±1.34）显著高于FT组织（0.50±0.23）（P＜0.05）,同时ENTPD5蛋白表达水平（1.37±0.53）显著高于FT组织（0.53 ±0.24）（P＜0.05）。EOC组织中免疫组化评分（7.21 ±3.89）显著高于FT组织（0.50±0.55）（P＜0.001）。1.2 ENTPD5高表达与EOC患者FIGO分期和转移相关（P＜0.05）。2.ENTPD5参与调控EOC细胞增殖与迁移2.1与对照组比较,敲低ENTPD5后,EOC细胞SKOV3与OVCAR8的克隆形成率明显下降（OVCAR8:46.32±1.74%VS37.45±3.24%,SKOV3:40.72±2.12%VS28.42±1.04%,P＜0.01）、划痕愈合能力明显受到抑制（OVCAR8:32.34±3.54%VS46.43±4.42%,SKOV3:45.41 ±3.76%VS62.63±5.87%P＜0.05）,细胞 凋 亡 比 例 明 显 增 加（OVCAR8:8.67±0.30VS18.64±0.31,SKOV3:3.57±0.34VS6.67±0.35,P＜0.01）,细胞周期阻滞于 G0/G1 期（OVCAR8:35.20±1.20VS42.70±2.53,SKOV3:41.26±3.07VS59.28±3.54,P＜0.05）。而过表达ENTPD5促进卵巢癌细胞体外的增殖与迁移（P＜0.05）。敲低ENTPD5显著抑制了3D 细胞模型中 EOC 细胞的生长（24.9±3.18 VS16.9±2.82,P＜0.01）。2.2与对照组比较,敲低ENTPD5后,OVCAR8和SKOV3细胞中内质网应激相关基因GRP78、p-eIF-2 α和CHOP的mRNA和蛋白的表达水平均显著下降（P＜0.01）。3.ENTPD5参与EOC顺铂耐药性调节3.1在铂治疗耐药卵巢癌组织中,ENTPD5免疫组化评分（8.2±2.39）显著高于铂治疗敏感卵巢癌组织（4.5±2.18）（P＜0.01）。3.2成功构建卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,其对顺铂耐药性（IC50:4.69±0.20μg/mL）显著高于亲本细胞 SKOV3（IC50:0.82±0.30μ/mL）（P＜0.01）。3.3顺铂作用下SKOV3细胞中内质网应激基因GRP78、CHOP、PERK的mRNA表达水平显著上升（P＜0.01）,在SKOV3细胞中GRP78蛋白、凋亡蛋白PARP-1表达随顺铂作用时间增加而升高,而耐药细胞中未见明显变化。ENTPD5在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中mRNA表达水平（8.02±1.87）显著高于顺铂敏感细胞SKOV3（1.00±0.00）（P＜0.001）,同时其蛋白表达水平（2.31±0.26）显著高于顺铂敏感细胞 SKOV3（1.00±0.00）（P＜0.01）。SKOV3 细胞中 ENTPD5 mRNA 的表达随顺铂浓度的增加而显著下降（P＜0.0 1）,而SKOV3/DDP细胞中却显著上升（P＜0.01）。3.4与对照组比较,敲低ENTPD5显著增强SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性（IC50:4.76±0.30VS3.54±0.529μg/mL,P＜0.01）,顺铂诱导的细胞凋亡显著增加（凋亡率:23.43±3.41VS8.84±1.57%,P＜0.01）。3.5敲低ENTPD5显著抑制SKOV3/DDP细胞中GRP78蛋白的表达（P＜0.01）。结论ENTPD5通过调控EOC细胞的增殖、迁移和顺铂耐药参与卵巢癌发病,GRP78/p-eIF-2α/CHOP通路可能是其主要分子机制。