背景胎盘是胎儿的附属物,胎儿的健康生长在很大程度上是由胎盘维持的。胎盘提供了母亲和胎儿之间的连接通道,也是调节营养物质、激素和其他小分子扩散的屏障,其中胎盘血液是给胎儿提供营养并促进胎儿生长所必需的,胎盘血液的充分灌注依赖于滋养层细胞对子宫-胎盘动脉的侵润和重塑的精确调节。大量研究表明在患有子痫前期（Pre-eclampsia,PE）的妇女中,母体和胎盘的血管功能障碍在其发病机制中发挥了重要作用,并且可以持续到产后一段时间。如果滋养层细胞的侵润、迁移或者融合出现异常,会导致一些潜在的病理出现包括胎盘形成受损、螺旋动脉不完全重塑和内皮损伤,继而引起免疫因素、线粒体应激及促血管生成物质和抗血管生成物质的失衡,并进一步加剧了这些病理现象。PE是一种与妊娠有关的多器官功能障碍疾病,其特征是高血压和蛋白尿。它在全世界的发病率中占妊娠女性的2-8%,它是孕产妇及胎儿死亡和发病的主要原因之一,尤其是早发型重度子痫前期（Early-onset severe pre-eclampsia,EOSP）。目前认为PE是一种多因素疾病,其发病机制不能归因于单一因素,如遗传、免疫或环境因素;相反,它是一种由不同因素的复杂组合表现出来的疾病。PE患者在怀孕20周后出现血管功能障碍,如果不治疗,会导致中风、肾衰竭、肺水肿、肝破裂和子痫。到目前为止,唯一有效的治疗方法是及时娩出胎儿和胎盘,但这导致了较高早产率。因此,及时发现并对PE进行医学干预,降低孕产妇的不良结局是我们研究PE的目的。长期以来,PE被认为是一种两阶段的疾病,但最近的研究者提出了关于这种疾病的六阶段模型,第二和第三阶段处于妊娠早期胎盘发育,此阶段发生蜕膜化和母胎循环的建立。为了寻找最佳的预防、筛查、诊断和治疗方法,研究者将注意力都集中于这一阶段。Hippo/yes-associated protein 1（YAP1）信号通路是进化中的一种保守的信号通路。它主要通过调节细胞的增殖、分化和凋亡来参与调节干细胞的自我更新,器官大小和组织再生。YAP1是Hippo通路中的转录共激活子,同时它也被该通路负调控。YAP1的表达水平变化影响着多种肿瘤的发生和进展,包括促进恶性表型、癌细胞的扩增和耐药,然而与此种现象相关的具体分子机制尚未被深入研究。最近,有研究发现与正常妊娠相比YAP1在EOSP胎盘中表达下降,但是具体分子机制尚未明了。我们研究发现YAP1通过CCN1促进胎盘滋养层细胞的侵润和迁移,这些结果提示YAP1的低表达可能是导致EOSP的原因之一。目的通过本课题的研究,阐述YAP1通过下游底物CCN1促进人胎盘滋养层细胞的侵润和迁移的功能以及YAP1低表达后参与EOSP发生的可能分子机制。方法1.收集符合纳入及排除标准的产妇胎盘组织样品,用4%多聚甲醛处理后进行蜡块包埋或者用RNAlater处理后冰冻于液氮中进行下游实验用。2.提取上述收集的人胎盘组织及干扰YAP1后的HTR-8/SVneo细胞中的总RNA,用RT-qPCR技术验证YAP1及CCN1的表达。3.用免疫组化技术对上述收集的人胎盘组织中YAP1及CCN1的表达进行组织定位。4.干扰YAP1及CCN1后用transwell实验检测HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移能力的变化。5.用Western Blot技术检测干扰YAP1后HTR-8/SVneo细胞中YAP1及CCN1的蛋白表达。6.干扰YAP1及CCN1后进行CCK-8实验检测是否对HTR-8/SVneo细胞的增殖有影响。7.干扰YAP1及CCN1后进行流式细胞术实验检测是否对HTR-8/SVneo细胞的凋亡及周期有影响。结果1.与正常妊娠相比,早发型重度子痫前期胎盘组织中YAP1的表达显著下降,YAP1在人胎盘组织中的CTB和EVT的细胞中表达,并不在STB中表达。2.YAP1基因干扰后能显著降低HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移能力。3.在人胎盘滋养层细胞中CCN1也是YAP1的下游底物。4.CCN1基因干扰后能显著降低HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移能力。5.CCN1主要介导YAP1促进人胎盘滋养层细胞的侵润和迁移的作用,而非其抑制凋亡的作用。6.加入CCN1重组蛋白后部分逆转了 YAP1干扰后对HTR-8/SVneo细胞侵润和迁移的抑制作用,但是并不逆转YAP1干扰后对HTR-8/SVneo细胞增殖和凋亡的影响。结论1、在人胎盘滋养层细胞中,CCN1也是YAP1的下游底物,其能够介导YAP1促进人胎盘滋养层细胞的侵润和迁移作用;2、CCN1并不介导YAP1抑制人胎盘滋养层细胞的凋亡作用,其作用有可能通过YAP1其他下游底物介导;3、YAP1和CCN1均在早发型重度子痫前期胎盘组织中表达下降,其下降有可能是早发型重度子痫前期发生的原因之一。