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儿茶素类是茶多酚的主体组分,是茶叶最重要的特征代谢成分,同时也是构成茶叶品质的主要化学成分。儿茶素合成途径中可能涉及的酶类有肉桂酸羧化酶(C4H)、4-香豆酰CoA连接酶(4CL)、查耳酮合成酶(CHS)、查耳酮异构酶(CHI)、二氢黄酮3-羟化酶(F3H)、二氢黄烷醇4-还原酶(OFR)、无色花色素还原酶(LAR)、花青素还原酶(ANR)等。DFR/LAR是黄酮类化合物合成下游途径中的重要酶类,在儿茶素合成途径中具有重要的调节作用。本课题对茶叶中DFR/LAR酶反应产物进行了鉴定,建立了DFR/LAR酶活性的简单测定方法,较系统地研究了DFR/LAR的动力学性质,并探讨了不同部位茶鲜叶和茶细胞系中儿茶素C和GC与DFR/LAR活性间的相关性。主要研究结果如下:1.利用高效液相色谱(HPLC)、薄层层析(TLC)、紫外可见光扫描和香草醛-盐酸比色法分别对DFR/LAR酶促反应的产物无色花青素、儿茶素C和GC进行了鉴定。在此基础上,建立了1%香草醛-盐酸比色法检测DFR/LAR酶活性的简便方法。2.建立了以辅酶NADPH在反应体系中的消耗为基础的DRF/LAR酶活性检测方法。3.采用1%香草醛-盐酸比色法、NADPH消耗方法分别对DRF/LAR酶动力学特征进行了研究,结果表明,当底物为二氢槲皮素(DHQ)时,DRF/LARDHQ酶反应的最适温度在45~65℃表现最高、最适pH为5.0、7.5~8.0;当底物为二氢杨梅素(DHM)时,DRF/LARDHM酶反应的最适温度为45℃、最适pH为7.0。底物浓度与酶反应速率间的关系不表现为典型的米氏方程,存在底物抑制现象,经直接线性作图法得到两种底物的四个表观米氏常数为KNADPH-DHQ=0.888 mmol/L、KNADPH-DHM=0.925 mmol/L、KDHQ-NADPH=0.337 mmol/L、KDHM-NADPH=1.145 mmol/L。研究结果还显示,4mmol/LMg2+、100mmol/L SDS对DRF/LAR的活性有一定提高;EDTA在0~1 mmol/L范围内对DRF/LAR活性有极强的抑制作用,而Fe3+在0~1 mmol/L范围内对DRF/LAR活性有一定的抑制作用。4.对不同部位茶鲜叶与茶细胞系云茎63中的总儿茶素含量、儿茶素C和没食子儿茶素GC含量、DRF/LAR酶活性进行了测定,结果表明,无论茶鲜叶还是细胞系,DRF/LARDHM的酶活性均高于DRF/LARDHQ;随着茶鲜叶成熟度的增加,DRF/LAR酶活性逐步下降,儿茶素GC的含量与DRF/LARDHM酶活性呈正相关性。