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目的:沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)是一种严重危害人类健康的病原体,过度的炎症反应造成免疫病理损伤是Ct主要的致病机制。Ct唯一的一种分泌性质粒蛋白pORF5在Ct炎症反应中可能发挥重要作用。本实验研究pORF5质粒蛋白是否能引起BALB/c小鼠生殖道炎症反应,以及对炎症细胞因子(CKs)TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响,为进一步研究pORF5质粒蛋白的致病机制及防治提供实验依据。方法:重组质粒pGEX-6p-1/pORF5经PCR和双酶切鉴定后,转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经GlutathioneSepharose4B纯化和PreScission Protease切割GST标签后得到目的蛋白pORF5,SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定;采用快速冻干的方法浓缩pORF5蛋白,用BCA试剂盒测定该蛋白浓度。将pORF5蛋白分别在第1d、3d、6d接种于BALB/c小鼠阴道后穹窿,第7d处死小鼠,HE染色观察输卵管组织病理形态学改变,常规血细胞计数法计数外周血和阴道灌洗液中白细胞总数,瑞氏染色对外周血和阴道灌洗液中白细胞进行分类计数;ELISA方法检测血清、阴道灌洗液和小鼠脾细胞培养上清中的TNF-α、IL-1β和IL-6水平;MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应。结果:1.重组质粒pGEX-6p-1/pORF5在XL1-blue菌中高效表达出Mr约为54kDa的GST-pORF5融合蛋白,主要以可溶性的形式存在;融合蛋白经GlutathioneSepharose4B纯化和PreScission Protease切割GST标签后得到高纯度的目的蛋白pORF5;经浓缩后浓度达到3μg/μL。2. pORF5蛋白刺激组BALB/c小鼠输卵管壶腹部与峡部出现不同程度的肿胀,输卵管周围的结缔组织发生黏连,输卵管单侧或双侧发生了不同程度的扭曲、变形、阻塞与积水;而正常组与PBS组小鼠输卵管壶腹部及峡部未见肿胀,管腔内未见积水;pORF5蛋白刺激组小鼠的输卵管出现中性粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,PBS对照组与正常组BALB/c小鼠输卵管的炎症反应并不明显。pORF5组的BALB/c小鼠外周血中白细胞总数较正常组(P﹤0.05)与PBS组(P﹥0.05)均增多,pORF5组的中性粒细胞百分比高于正常组(P﹤0.05)与PBS组(P﹥0.05),淋巴细胞百分比低于正常组(P﹤0.05)与PBS组(P﹥0.05),单核细胞百分比高于正常组(P﹥0.05)与PBS组(P﹥0.05);pORF5组的BALB/c小鼠阴道分泌物中白细胞总数较正常组(P﹤0.05)与PBS组(P﹥0.05)均增多。3. pORF5组的BALB/c小鼠外周血中TNF-α水平显著高于正常组和PBS组(P﹤0.01),IL-1β水平显著高于正常组和PBS组(P﹤0.01),IL-6水平显著高于正常组(P﹤0.01)和PBS组(P﹤0.05);pORF5组的BALB/c小鼠阴道分泌物中TNF-α水平显著高于正常组和PBS组(P﹤0.01),IL-1β水平显著高于正常组和PBS组(P﹤0.05),IL-6水平显著高于正常组和PBS组(P﹤0.01)。4. pORF5组的BALB/c小鼠脾细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著高于正常组和PBS组(P﹤0.01);pORF5组BALB/c小鼠脾淋巴细胞经pORF5蛋白刺激后的增殖活性较正常组和PBS组(P﹤0.01)明显增强,且差异具有显著性。结论:1.成功表达纯化得到54kDa的GST-PORF5融合蛋白以及不含GST标签的28kDa的pORF5蛋白;2. pORF5蛋白能引起BALB/c小鼠输卵管的炎症病理损伤;3. pORF5蛋白能诱导BALB/c小鼠产生TNF-α、IL-1β和IL-6等前炎症因子。