紫色非硫细菌外周捕光复合体性质及其类胡萝卜素调控能量传递效率的分子机制研究

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不产氧光合细菌是研究光合作用最为深入的一个类群。太阳能主要由光合元件外周捕光复合体(LH2)吸收,并通过中心捕光复合体(LH1)传递到反应中心(RC)进行光能的转化。不产氧光合细菌的LH2呈现高度多样性,但其结构、性质以及功能之间的关系,还未见系统报道。另外,类胡萝卜素丰度多样,类胡萝卜素取代基、极性和共轭长度的差异与LH2结构和功能关系的研究还缺乏系统研究。针对上述问题,本课题选用Rhodobacter.azotoformans(Rho.azotoformans)和Rhodopseudomonas palustris(Rps.palustris)为研究材料,主要采用蛋白质层析技术和光谱法、结合分子间相互作用的动力学和热力学分析,系统研究了这两株菌LH2的纯化条件、色素组分、性质和能量传递效率;脱辅基蛋白与辅因子Car和细菌叶绿素(BChl)分子的相互作用;光照强度与外源物质对LH2类型及其Car的调控;Car复合组分对LH2能量传递的调控机制。主要研究结果如下:  1.采用不同的膜蛋白分离策略,系统研究了Rba.azotoformans和Rps.palustris色素蛋白复合体的纯化方法。在破壁条件、表面活性剂种类和浓度、粗分级方法和条件、细分级条件等方面进行了选择和优化,获得2个菌株中色谱纯和光谱纯的PPC;硫酸铵盐析结合离子交换层析可以得到不同光谱类型的PPC;超离结合离子交换层析可以得到PPC,操作简便,但对于纯化多拷贝pucBA表达形成的LH2较难实现;LDAO用于增溶膜蛋白,可以达到较好的增溶效果;在Bradford蛋白定量法的基础上进行修正,消除了Car和BChl对PPC蛋白定量的干扰,达到简便易行测定蛋白含量的效果;采用冷冻干燥法浓缩样品,以12%浓度分离胶电泳,上样浓度为6-9μg/μL,得到电泳纯的PPC,包括2种LH2,2种RC和2种RC-LH1。  2.Rba.azotoformans LH2(A-LH2)和Rps.palustris LH2(P-LH2)色素组分分析表明:A-LH2含有2种BChl,BChl aP和BChl aDHGG,1种Car,球形烯。P-LH2含有4种BChl,BChl aP、BChl aGG、BChl aTHGG和BChl aDHGG和4种Car,3,4-双脱氢紫菌红素乙、紫菌红素乙、脱水紫菌红醇和番茄红素。通过温度、pH、SDS和光照的作用动力学过程的分析,揭示了两种复合体性质的差异。在不同条件下,P-LH2比A-LH2表现出更强的稳定性。通过调节SDS浓度和pH获得两种B800缺失LH2。通过B800 BChl的脱除,获得了两类Rps.palustrisB800 BChl解离的LH2,为异质性LH2的分离提供了新的思路。  3.光照强度对 LH2调控研究表明:随着光照强度的降低,光合生长受到抑制,细胞的生长速率降低,LH2中结合Car的种类和含量发生变化,以提高捕光效率。Rps.palustris CQV97合成LH4以适应光强。Rba.azotoformans具有独特的适应光强机制,包括:合成了LH3,触发Rhodobacter中鲜有报道的螺菌黄质途径Car的合成并结合在LH3中。LH3中的Car采取扭曲构象,提高了LH3的能量传递效率。通过全基因组中puc和crt的分析,进一步确定Rba.azotoformans独特的适应光强能力具有物质基础。  4.通过在培养基中添加不同浓度二苯胺,研究二苯胺对细胞生长和Car合成的抑制规律,并获得Car部分缺失的LH2。球形烯和3,4-双脱氢紫菌红素乙分别在Rba.azotoformans和Rps.palustris菌株中的相对含量,随着DPA浓度的增大而明显增加。在75μmol/L和100μmol/L的DPA浓度下,分别纯化到Car缺失率为60-70%的P-LH2和A-LH2。室温下、10mmol/L Tris-HCl-0.1%LDAO缓冲液(pH8.0)体系中,通过反复超声孵育,不同共轭体系的Car与部分缺失Car的LH2发生自组装,组装效率在24%-33%之间;重组LH2的能量传递效率,随着重组Car的共轭体系增加而降低,基本与现行观点相符。但在P-LH2中,紫菌红素乙重组后,使重组LH2的能量传递效率有较大提高,表明Car之间的互作影响能量传递效率。  综上所述,本文通过Rba.azotoformans和Rps.palustris LH2稳定性分析,揭示了两种LH2的结构紧密度的差异,前者结构紧密而后者结构松散,为紫色非硫细菌不同物种在特殊环境下的适应性提供理论基础。首次在Rhodobacter中分离到LH3,并阐释了Rba.azotoformans独特的低光强适应机制,为异常光谱与结构和功能之间的关系的研究增加了新的内容。提出复合Car间的相互作用和构象对于LH2性质与能量传递效率的影响规律,并通过不同共轭体系Car和LH2的组装得到了实验证据。
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