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基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和其受体CXCR4的结合可以引起多种细胞的迁移。CXCR4的高表达与白血病的发展有关。另外,白血病的复发与白血病细胞的浸润关系密切。白血病细胞的迁移是浸润的关键步骤。因此,研究SDF-1和CXCR4结合引起的信号转导过程中的关键蛋白对白血病细胞迁移的影响对于揭示白血病迁移的机制具有重要意义。非受体酪氨酸激酶在细胞表面受体引起的信号向下传递过程中发挥关键作用。ABL1属于非受体酪氨酸激酶家族,其转化形式BCR-ABL与白血病关系密切。然而,ABL1在白血病中的作用尚无深入研究。因此,本论文研究了ABL1在SDF-1引起的白血病细胞的迁移中的作用和机制。
首先,利用transwell模型,将两种白血病细胞系分别加入上室,下室加入SDF-1进行迁移实验,并引入CXCR4的拮抗剂和ABL1的抑制剂,确定SDF-1/CXCR4和ABL1在迁移过程中的作用。随后,将细胞用SDF-1刺激一定时间后,以活化型ABL1的底物与GST形成的融合蛋白进行pulldown实验,研究SDF-1对ABL1的活化情况。并在SDF-1刺激后分离细胞膜和细胞质,通过Westernblot实验检测ABL1在细胞各个组分中的分布情况。最后,用ABL1抑制剂预处理细胞,再用SDF-1分别刺激,以活化型Rho的底物与GST形成的融合蛋白进行pulldown实验,研究ABL1的活性与Rho的关系。
结果如下:SDF-1可以诱导Jurkat和CCRF-CEM细胞的迁移;CXCR4的拮抗剂plerixafor可以抑制这一过程,表明SDF-1与细胞表面受体CXCR4相结合引起细胞的迁移;用ABL1的抑制剂nilotinib预处理可以抑制细胞的迁移,提示ABL1可能参与了SDF-1引起的细胞迁移;SDF-1刺激后ABL1被活化;细胞质中的ABL1减少,细胞膜上的ABL1增加,表明伴随着ABL1的活化,ABL1从细胞质募集到细胞膜上,这为ABL1参与细胞迁移提供了基础;SDF-1刺激后,Jurkat细胞中的RhoA和RhoC被活化,nilotinib对这一过程起抑制作用,提示ABL1可能通过活化RhoA和RhoC参与迁移过程的调控。因此,我们的研究发现了一条SDF-1/CXCR4-ABL1-RhoA/C-细胞迁移信号通路。这一研究的完成将为T-ALL的靶向治疗提供理论依据。
首先,利用transwell模型,将两种白血病细胞系分别加入上室,下室加入SDF-1进行迁移实验,并引入CXCR4的拮抗剂和ABL1的抑制剂,确定SDF-1/CXCR4和ABL1在迁移过程中的作用。随后,将细胞用SDF-1刺激一定时间后,以活化型ABL1的底物与GST形成的融合蛋白进行pulldown实验,研究SDF-1对ABL1的活化情况。并在SDF-1刺激后分离细胞膜和细胞质,通过Westernblot实验检测ABL1在细胞各个组分中的分布情况。最后,用ABL1抑制剂预处理细胞,再用SDF-1分别刺激,以活化型Rho的底物与GST形成的融合蛋白进行pulldown实验,研究ABL1的活性与Rho的关系。
结果如下:SDF-1可以诱导Jurkat和CCRF-CEM细胞的迁移;CXCR4的拮抗剂plerixafor可以抑制这一过程,表明SDF-1与细胞表面受体CXCR4相结合引起细胞的迁移;用ABL1的抑制剂nilotinib预处理可以抑制细胞的迁移,提示ABL1可能参与了SDF-1引起的细胞迁移;SDF-1刺激后ABL1被活化;细胞质中的ABL1减少,细胞膜上的ABL1增加,表明伴随着ABL1的活化,ABL1从细胞质募集到细胞膜上,这为ABL1参与细胞迁移提供了基础;SDF-1刺激后,Jurkat细胞中的RhoA和RhoC被活化,nilotinib对这一过程起抑制作用,提示ABL1可能通过活化RhoA和RhoC参与迁移过程的调控。因此,我们的研究发现了一条SDF-1/CXCR4-ABL1-RhoA/C-细胞迁移信号通路。这一研究的完成将为T-ALL的靶向治疗提供理论依据。