CdTe量子点靶向检测宫颈癌E6/E7纳米探针的制备及应用

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背景和目的量子点纳米荧光材料具有独特的化学性质和光物理性质,如发射光谱非常窄且对称、激发光谱较宽且连续、光稳定性较强、荧光寿命较长等优点,适合在生物检测、疾病诊断和治疗等许多方面作为荧光成像材料,如肿瘤检测等。高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPV),尤其是HPV16与宫颈癌的发生与演进有密切的病因学关系。HR-HPV16的两个病毒癌基因E6/E7的持续表达是引起宿主细胞永生化、恶性转化、恶性表型维持及侵袭转移的关键,提示以E6/E7标记的纳米荧光探针对HPVs相关肿瘤可能具有靶向性识别作用。本研究制备了水相羧基修饰的CdTe量子点,再将其与E6/E7抗体通过EDC/NHS反应偶联,得到靶向HPV16E6/E7的纳米荧光成像探针,并用此探针对HPV16 E6/E7表达阳性的宫颈癌CaSki细胞进行荧光成像。方法1.制备CdTe量子点。2.制备以HPV16 E6/E7为靶点的纳米荧光探针。3.培养HPV16 E6/E7表达阳性的宫颈癌CaSki细胞作为实验组,培养HPV16 E6/E7表达阴性的宫颈癌C33A细胞作为对照组。4.通过倒置荧光显微镜观察以E6/E7为靶点的纳米荧光探针对HPV16 E6/E7表达阳性的CaSki细胞的识别能力。结果1.制备CdTe量子点:通过水相回流的方法,制备出CdTe量子点。所制备的CdTe量子点的最终浓度为10mmol L-1,粒度测试表明量子点的颗粒平均水合粒径为11.6 nm。经表征荧光较强,可用于后续实验。2.以E6/E7为靶点的纳米荧光探针的制备:通过EDC/NHS等试剂通过偶联反应将CdTe量子点与抗体分别偶联得到以E6/E7为靶点的纳米荧光探针。3.以E6/E7为靶点的纳米荧光探针对HPV16 E6/E7表达阳性的CaSki细胞的识别能力:用以E6/E7为靶点的纳米荧光探针对HPV16 E6/E7表达阳性的CaSki细胞(实验组)进行荧光识别,当量子点偶联的E6/E7抗体和CaSki细胞孵育12h之后,CaSki细胞表现出绿色荧光。用以E6/E7为靶点的纳米荧光探针对HPV16 E6/E7表达阴性的C33A细胞(对照组)进行荧光识别,当量子点偶联的E6/E7抗体和C33A细胞孵育12h之后,C33A细胞没有荧光信号。4.量子点的光稳定性:CdTe量子点标记的宫颈癌CaSki细胞被蓝色荧光照射60 min后,荧光信号稳定未见光漂白作用。5.细胞毒性研究:将以E6/E7为靶点的纳米荧光探针与宫颈癌CaSki细胞共同孵育24 h,发现共同培养后细胞形态无明显变化。结论1.成功制备了以HPV16 E6/E7为靶点的CdTe纳米荧光探针。2.初步证明了以HPV16 E6/E7为靶点的纳米荧光探针可以特异性识别E6/E7表达阳性的宫颈癌CaSki细胞。
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