新疆伊犁黑蜂蜂粮总黄酮的提取、分离纯化及其抗氧化活性的研究

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本研究采用由拉合曼公司提供的伊犁野花黑蜂蜂粮为原料,系统的对蜂粮总黄酮的提取、分离纯化、抗氧化性等方面进行深入的研究,以下为这些研究的实验结果:通过预试验对蜂粮几种溶剂的提取液进行定性分析,可以确定蜂粮中含有黄酮类化合物。采用响应面法对提取蜂粮总黄酮的工艺条件进行了优化,结果发现用80%的乙醇以1:50的料液比在60℃水浴提取1h,蜂粮总黄酮的提取率达到最大为3.433%。通过对六种大孔树脂蜂粮总黄酮吸附解吸情况的考察,认为X-5的吸附解吸特性最适合蜂粮总黄酮的纯化。经X-5富集纯化后,最终产品中蜂粮总黄酮纯度为14.23%,虽然粗提液中纯度为4.53%,纯度提高了3.01倍。采用聚酰胺对大孔树脂X-5富集后的产物进行进一步的纯化。在最佳纯化条件pH值8.0、样液浓度0.522mg/mL、柱高为19mL,上样流速0.5mL/min、洗脱剂乙醇浓度为90%,洗脱液流速为1.0mL/min,经过两级精制,蜂粮总黄酮的纯度达到了52.6%,而产品的提取率为1.68%。以芦丁和槲皮素为标品,对纯化后的蜂粮总黄酮和粗提液进行薄层色谱分析,发现在展开剂A正丁醇-乙醇-水(1:4:5)下最终产物和粗提液都只有一个斑点且Rf值与槲皮素相同,在展开剂B甲醇-醋酸-水(90:5:5)下最终产物和粗提液除了槲皮素外还有一个Rf值为的斑点,与标品无法对应,需要进行进一步鉴定。通过DPPH、羟自由基、超氧阴离子清除能力实验和还原力实验考察蜂粮总黄酮的自由基清除能力用来评价蜂粮总黄酮的抗氧化活性,考察结果认为蜂粮总黄酮对于DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子有较好的清除率,可以起到很好的清除自由基的作用。通过还原力实验,发现蜂粮总黄酮无法与同浓度的Vc的还原力比拟,但是出入不大,说明蜂粮总黄酮具有较好的抗氧化活性。
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