新型氧杂多环荧光染料的合成及其在蛋白染色中的应用

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作为一种重要的翻译后修饰,蛋白质糖基化在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用。凝集素芯片作为近年来新问世的,用于检测糖蛋白的技术,由于其具有高通量,便捷,快速等优点,得到了广泛的关注。用于制作凝集素芯片的样品多采用荧光标记,后用消散场荧光激活检测技术进行信号检测。现今常用于荧光标记的染料多为菁染料,但其常存在合成路线复杂,成本居高不下,水溶性较差,以及随着甲川链增加而稳定性逐渐下降等问题。因此,摒除必须由菁染料标记糖蛋白的刻板印象,合成修饰得到新型的荧光染料,弥补其缺陷,具有重大的意义。本文选择修饰氧杂蒽结构,以得到具有标记蛋白能力的荧光染料为研究目的,设计,合成,并表征出两类共六种氧杂多环结构的荧光染料,对其性能及其应用进行研究。主要包括以下两部分:(1)合成了氧杂多环结构为主体的非刚性平面的两种新型荧光染料YD-1和YD-2,刚性平面的四种新型荧光染料YN-1,YN-2,YH-1,和YH-2以及修饰罗丹明B得到的新型荧光染料YB。通过HRMS(ESI)、1H NMR、13C NMR和IR对这七种新化合物的结构进行了表征;对除YB之外的其余六种染料的光谱性质进行了检测,证明了这六种染料都具有较好的耐光性;其中,YD系列的荧光的发射波长在600nm附近,斯托克斯位移在80nm左右;YN与YH系列的荧光的发射波长更偏向于近红外范围(600nm以上),斯托克斯位移基本在60-80nm,这些优点能有效的降低荧光成像中生物自体发光所带来的干扰;根据p H对染料荧光强度的影响可知其在生物体内p H范围内具有稳定的荧光性质。(2)将YD,YN和YH三系列六种新型荧光染料应用于糖蛋白的标记并取得不错的效果,表明这些染料能以共价键的形式与蛋白质结合,给予糖蛋白以荧光信号,在之后分析蛋白质上的糖链种类,制作凝集素芯片等生物应用上具有实际的应用价值。
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