论文部分内容阅读
本论文以黑林1号杨（P．simonii×P．nigra）×P．15 ACL组培生根叶片为材料，采用石蜡切片法观察了黑林1号杨叶片在外源激素0.3mg·L-1NAA的诱导下不定根的发生过程，结果表明，黑林1号杨组培叶片不定根的发生大致经过三个阶段：1诱导阶段；2根原基形成阶段：3不定根分化伸长阶段。 在组培叶片不定根发生不同时期形态解剖学观察的基础上，采用间接酶联免疫法测定叶片生根过程中内源激素IAA、ZR、GA3和ABA的动态变化，探讨了内、外源激素与叶片不定根发生的关系。研究表明：不定根的发生与内源IAA水平状况有密切关系；ZR对不定根根原基的发生没有明显的作用，但在不定根的进一步生长发育过程中发挥着重要作用；低水平的GA3、高水平ABA和较高比值的ABA／GA3利于不定根的发生。 采用SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术研究了黑林1号组培生根叶片不同时期的蛋白质变化，确定了其蛋白质提取的最佳方法。研究结果表明，在组培叶片不定根的发生过程中，从诱导阶段到根原基形成阶段和不定根分化伸长阶段存在两个逐渐减弱的蛋白谱带：76.3×103和64.1×103，在不定根分化伸长阶段出现了两条新的蛋白差异谱带：47.3×103蛋白和41.4×103蛋白。 采用双向电泳技术对黑林1号杨组培叶片不定根的发生过程中不同时期的蛋白质样品进行了分析，建立了适合于黑林1号杨叶片的双向电泳方法，获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳图谱。用ImageMaster图像软件分析，获得了部分差异蛋白的信息，筛选出许多表达上有明显的质（蛋白质点的新增、消失等）和量（蛋白质点染色的深浅）变化的蛋白质点，这些差异蛋白多是低丰度和低相对分子质量蛋白，这些蛋白可能分别与不定根原基的诱导形成、分化和不定根的进一步生长发育相关。电泳图谱经分析后选取不同时期特异表达的5个蛋白点进行基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）测定其胶内酶解后的肽质量指纹图谱，设定参数在数据库中进行检索，初步鉴定为核糖体灭活蛋白RIP，氧化物水解酶ATsEH，RNA聚合酶SDE1等一些与细胞代谢、生长发育、信号转导等有关的蛋白质，推测这些蛋白与不定根原基的形成、分化和进一步生长发育过程密切相关。