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随着生命科学的发展,作为研究生命科学基础条件之一的实验动物也在我国得到长足的发展。而小鼠在众多的实验动物中应用最为广泛。因此建立一套有效的小鼠种质资源保存方案显得尤为重要,胚胎工程学和低温生物学的联合应用在各种实验动物的保种中已获得成功。小鼠精子冷冻技术成为胚胎保种的有效方法之一,复苏精子体外受精技术对于相当一部分品系小鼠来说已很成熟,但是对于一些特殊品系小鼠的冻融精子体外受精率仍然很低,卵母细胞胞浆内单精子注射技术成为解决这一问题行之有效的方法。本文采用R18S3和FERTIUPTM-CPA两种冷冻保护剂,对DBA/2、C57BL/6J、KM和B6.129S7 -Ldlrtm1Her/J四个品系的小鼠精子进行冷冻,冷冻精子用三种方法复苏,以体外受精率来评价精子冷冻的效果。三种复苏方法分别为:（1）冷冻精子37℃水浴15min,解冻液为HTF;（2）冷冻精子60℃水浴6s, 37℃水浴15min ,解冻液为HTF;（3）冷冻精子60℃水浴6s, 37℃水浴15min,解冻液为FERTIUP TM-PM。以R18S3作为冷冻保护剂,DBA/2（73.3%,88.4%,55.6%）和KM（64.9%,60.2%,39.6%）品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著（P<0.05）,C57BL/6J（3.0%,10.3%,3.7%）和B6.129S7 -Ldlrtm1Her/J（0%,5.0%,0%）结果差异不显著（P>0.05）;以FERTIUPTM-CPA作为冷冻保护剂,DBA/2（33.6%,14.1%,91.6%）、C57BL/6J（8.4%,21.0%,4.9%）和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J（8.2%,10.0%,28.9%）品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著（P<0.05）,而KM（48.1%,48.0%,48.1%）小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异不显著（P>0.05）。对于DBA/2和KM品系小鼠来说,用R18S3或FERTIUPTM-CPA冷冻精子,选择一种恰当的复苏方法,均可以得到较理想的体外受精率,而C57BL/6J和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J品系小鼠无论采用哪种冷冻保护剂,选择何种方法复苏精子,得到的体外受精率都较低。为了提高C57BL/6J和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J品系小鼠冷冻复苏精子体外受精率,本实验采用卵母细胞胞浆内单精子（ICSI ）注射技术。将C57BL/6J和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J品系小鼠的冷冻精子37℃水浴15min复苏,复苏精子利用Piezo装置分离精子头尾,将精子头注入卵母细胞胞浆。C57BL/6J与B6.129S7-Ldlrtm1Her/J小鼠冷冻复苏精子体外受精率分别达到44.7%和50.0%,与冻融精子常规体外受精（3.5%,4.3%）相比,结果有明显提高。