【摘 要】
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目的通过山茱萸多糖对OX-LDL诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）自噬及凋亡影响,探讨山茱萸多糖对内皮细胞损伤的保护作用,并进一步观察山茱萸多糖的作用机制是否通过调控腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子1（SIRT1）通路,从而对血管内皮细胞发挥保护作用。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,OX-LDL作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其损伤建立模型。用山茱萸多糖（6、12
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目的通过山茱萸多糖对OX-LDL诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）自噬及凋亡影响,探讨山茱萸多糖对内皮细胞损伤的保护作用,并进一步观察山茱萸多糖的作用机制是否通过调控腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子1（SIRT1）通路,从而对血管内皮细胞发挥保护作用。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,OX-LDL作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其损伤建立模型。用山茱萸多糖（6、12.5和25mg/mL）预处理1h,并与100ug/mL的OX-LDL连续孵育24h,采用MTT法检测HUVECs活力、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH,流式细胞术检测HUVECs凋亡率,筛选出适合的山茱萸多糖浓度用于后续的实验。山茱萸多糖对OX-LDL诱导HUVECS损伤及SIRTI信号通路的作用。实验分6组,空白对照组（si-Control预转染HUVECs）;模型组（si-Control预转染HUVECs中加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;山茱萸多糖组（si-Control预转染HUVECs中先加入25mg/mL浓度的山茱萸多糖孵育1h,再加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;si-SIRT1对照组（si-SIRT1预转染HUVECs）;si-SIRT1预转染组（si-SIRT1预转染HUVECs中加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;si-SIRT1+山茱萸多糖组（si-SIRT1预转染HUVECs中先加入25mg/mL浓度的山茱萸多糖孵育1h,再加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）。AMPK/SIRT1通路介导山茱萸多糖对OX-LDL诱导HUVECS的作用。实验分6组,空白对照组（si-Control预转染HUVECs）;模型组（si-Control预转染HUVECs中加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;山茱萸多糖组（si-Control预转染HUVECs中先加入25mg/mL浓度的山茱萸多糖孵育1h,再加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;si-AMPK对照组（si-AMPK预转染HUVECs）;si-AMPK预转染组（si-AMPK预转染HUVECs中加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）;si-AMPK+山茱萸多糖组（si-AMPK预转染HUVECs中先加入25mg/mL浓度的山茱萸多糖孵育1h,再加入100ug/mL的OX-LDL孵育24h）。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,比色测定试剂盒检测Caspase-3活力,Western Blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3I/LC3II和SIRT1、P-AMPK相关蛋白表达水平。结果不同浓度山茱萸多糖（6.25、12.5和25mg/mL）与OX-LDL同时作用HUVECs时,细胞存活率逐渐上升,LDH释放逐渐减少,凋亡率降低（P＜0.05）;与空白对照组比,模型组能够显著降低HUVECs的活力,增加细胞中LDH的释放、凋亡率及Caspase3活性（P＜0.05）,同时增加了自噬相关蛋白Beclin-1和LC3I/LC3Ⅱ的表达（P＜0.05）,而SIRT1和P-AMPK蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组比,山茱萸多糖可逆转OX-LDL诱导的细胞活力下调、LDH释放和细胞凋亡率及Caspase3活性增加（P＜0.05）;同时减低了自噬相关蛋白Beclin-1和LC3I/LC3II的表达（P＜0.05）;此外,山茱萸多糖增加OX-LDL诱导的HUVECs中SIRT1和P-AMPK蛋白的表达（P＜0.05）;si-SIRT1消除了山茱萸多糖对OX-LDL诱导的细胞活力上升和LDH释放减低、caspase-3活性、细胞凋亡率和细胞自噬蛋白表达增加（P＜0.05）;同时降低SIRT1蛋白的表达（P＜0.05）;si-AMPK同样消除了山茱萸多糖对OX-LDL诱导的细胞活力的上升和LDH释放的降低,除此之外,si-AMPK还进一步降低了SIRT1的表达（P＜0.05）。结论山茱萸多糖对OX-LDL诱导的HUVECs的损伤具有明显保护作用,其机制可能与激活AMPK/SIRT1通路有关。
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