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目的:本研究通过归类整理张伟教授临床治疗间质性肺疾病(ILD)的中药复方,总结其用药规律。并通过大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)体外培养,观察中药单体黄芪甲苷对大鼠PMVECs的干预作用,探讨其是否通过调控miRNA-210-3p而影响下游血管新生因子的表达,如:血管内皮生长因子(VEGF),同时分析其对大鼠PMVECs增殖、迁移的影响,从而探讨黄芪甲苷干预血管生成的机制,为ILD的临床治疗提供有效的思路及理论支持。
方法:(1)临床部分整理2018年1月-2019年9月张伟教授诊治的ILD门诊患者首诊病例,从中选择符合本次研究纳入标准病例249例,处方249首。通过频数分析的方法,整理药物的频次、分类,以此分析张伟教授治疗ILD的用药规律。(2)细胞实验部分选取大鼠PMVECs为研究细胞,以黄芪甲苷作为实验药物,将实验分为5组:空白对照组(N)、IL-6干预组(A)、IL-6干预后给予黄芪甲苷组(B)、IL-6干预后转染miRNA-210-3p mimis组(C)、IL-6干预后转染miRNA-210-3p mimis NC组(D)。首先用CCK-8法检测细胞增殖,得出IL-6的工作浓度及黄芪甲苷合适浓度,进行后续实验。除N组外,其余各组应用IL-6处理12h。然后B、C、D组分别加入黄芪甲苷、miRNA-210-3p mimis、miRNA-210-3p mimis NC干预24h,A组及N组不予任何处理。应用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell检测各组细胞迁移,RT-PCR检测各组miRNA-210-3p和VEGF mRNA表达,Western blotting检测各组VEGF蛋白水平。
结果:(1)在纳入研究的249首中药复方中,包含81味中药,总频次3505次,剔除甘草(249次),总频次3256次。其中应用30次以上的有34种,共使用2955次,占药物总频次(剔除甘草后)的90.76%,其中黄芪使用频次最高;使用频数大于60次的中药有24味,将这些中药归类,药类使用次数最高的为化痰药、补气药和止咳平喘药。(2)根据CCK-8结果,将IL-6的浓度(1μg/mL)定为干预浓度,黄芪甲苷浓度(10μM)定为实验浓度。IL-6干预大鼠PMVECs后,与N组相比,IL-6能抑制细胞的增殖和迁移,下调miRNA-210-3p,VEGF mRNA表达下降,VEGF蛋白水平降低。过表达miRNA-210-3p可促进细胞的增殖及迁移,miRNA-210-3p表达增加,上调VEGF mRNA,并使VEGF蛋白水平升高;与A组相比,B组可以明显促进细胞的增殖及迁移,提高miRNA-210-3p的表达,并使VEGFmRNA表达增加,VEGF蛋白水平升高。
结论:(1)张伟教授在临床治疗间质性肺疾病中多应用黄芪配伍治疗,重视补益肺脾之气,同时兼顾活血化瘀、化痰止咳平喘,临床治疗有一定效果,可指导辨证、用药。(2)黄芪甲苷能够促进大鼠PMVECs的增殖及迁移,促进VEGF的表达,可能是通过上调miRNA-210-3p的表达引起的。
方法:(1)临床部分整理2018年1月-2019年9月张伟教授诊治的ILD门诊患者首诊病例,从中选择符合本次研究纳入标准病例249例,处方249首。通过频数分析的方法,整理药物的频次、分类,以此分析张伟教授治疗ILD的用药规律。(2)细胞实验部分选取大鼠PMVECs为研究细胞,以黄芪甲苷作为实验药物,将实验分为5组:空白对照组(N)、IL-6干预组(A)、IL-6干预后给予黄芪甲苷组(B)、IL-6干预后转染miRNA-210-3p mimis组(C)、IL-6干预后转染miRNA-210-3p mimis NC组(D)。首先用CCK-8法检测细胞增殖,得出IL-6的工作浓度及黄芪甲苷合适浓度,进行后续实验。除N组外,其余各组应用IL-6处理12h。然后B、C、D组分别加入黄芪甲苷、miRNA-210-3p mimis、miRNA-210-3p mimis NC干预24h,A组及N组不予任何处理。应用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell检测各组细胞迁移,RT-PCR检测各组miRNA-210-3p和VEGF mRNA表达,Western blotting检测各组VEGF蛋白水平。
结果:(1)在纳入研究的249首中药复方中,包含81味中药,总频次3505次,剔除甘草(249次),总频次3256次。其中应用30次以上的有34种,共使用2955次,占药物总频次(剔除甘草后)的90.76%,其中黄芪使用频次最高;使用频数大于60次的中药有24味,将这些中药归类,药类使用次数最高的为化痰药、补气药和止咳平喘药。(2)根据CCK-8结果,将IL-6的浓度(1μg/mL)定为干预浓度,黄芪甲苷浓度(10μM)定为实验浓度。IL-6干预大鼠PMVECs后,与N组相比,IL-6能抑制细胞的增殖和迁移,下调miRNA-210-3p,VEGF mRNA表达下降,VEGF蛋白水平降低。过表达miRNA-210-3p可促进细胞的增殖及迁移,miRNA-210-3p表达增加,上调VEGF mRNA,并使VEGF蛋白水平升高;与A组相比,B组可以明显促进细胞的增殖及迁移,提高miRNA-210-3p的表达,并使VEGFmRNA表达增加,VEGF蛋白水平升高。
结论:(1)张伟教授在临床治疗间质性肺疾病中多应用黄芪配伍治疗,重视补益肺脾之气,同时兼顾活血化瘀、化痰止咳平喘,临床治疗有一定效果,可指导辨证、用药。(2)黄芪甲苷能够促进大鼠PMVECs的增殖及迁移,促进VEGF的表达,可能是通过上调miRNA-210-3p的表达引起的。