论文部分内容阅读
第一部分:冰毒对TLR-9介导的抗HIV活性的影响目的:观察冰毒对TLR-9的特异性配体CpG-ODN抑制巨噬细胞感染HIV作用产生的影响。方法:采集健康成人新鲜外周血,分离单个核细胞,再经贴壁法培养纯化为人巨噬细胞。用冰毒和/或多巴胺受体D1阻滞剂·(SCH23390), CpG-ODN对人巨噬细胞作预处理,然后用HIV Bal病毒感染细胞,分别在染毒后4、6、8、10、12天收集培养上清液,进行HIV逆转录酶活性检测,并在显微镜下观察冰毒对人巨噬细胞在CpG-ODN的作用下HIV感染的影响情况。结果:1.冰毒处理组的HIV逆转录酶活性均高于空白对照组2.ODN处理组的HIV逆转录酶的活性检测值与空白对照组相比明显减少。3.冰毒/ODN共处理组与单独ODN处理组相比HIV逆转录酶的活性明显增加。4.冰毒/ODN/SCH/处理组HIV逆转录酶活性显著低于冰毒/ODN组。结论:1. CpG-ODN通过TLR-9受体抑制人巨噬细胞HIV-1的感染,冰毒可减弱TLR-9抑制HIV感染巨噬细胞的作用。2.冰毒可能通过作用于多巴胺受体D1,减弱TLR-9介导的抗HIV感染作用。第二部分:冰毒抑制TLR-9介导的抗HIV作用机制的研究目的:观察冰毒对人巨噬细胞中TLR-9和IFN-α基因表达的影响,及其对TLR-9介导抗病毒信号转导途径中IRF-7、MyD88、MxA、ISG56等免疫因子表达的作用,探讨冰毒减弱TLR-9抑制HIV病毒复制的相关机制。方法:采集健康成人新鲜外周血,分离单个核细胞,再经贴壁法培养纯化为人巨噬细胞。用时间梯度和浓度梯度方法,加入冰毒对细胞进行培养,采用实时定量PCR检测细胞中TLR-9和内源性IFN-α基因mRNA水平。同时,采用荧光免疫及ELISA方法分别检测巨噬细胞中TLR-9和内源性IFN-α的蛋白表达。另外,用冰毒和/或多巴胺受体D1阻滞剂(SCH23390)及CpG-ODN对人巨噬细胞作预处理,通过实时定量PCR检测TLR-9介导抗病毒信号转导途径中IRF-7、MyD88、MxA、ISG56等基因mRNA表达水平。结果:1.冰毒处理组TLR-9基因表达量显著下降,且随着染毒量和天数而逐渐减少,具有剂量-效应和时间-效应关系(P值均<0.01)。2.冰毒/ODN处理组TLR-9基因表达量明显低于ODN处理组;冰毒/ODN/SCH处理组TLR-9基因表达量高于冰毒/ODN组(P值均<0.01)。3.冰毒处理组IFN-α基因表达量显著下降,且随着所加冰毒的量和处理天数逐渐减少,具有剂量-效应和时间-效应关系(P值均<0.05)。4.冰毒/ODN处理组IFN-α基因表达量明显低于ODN处理组;冰毒/ODN/SCH处理组IFN-α基因表达量明显高于冰毒/ODN组(P值均<0.05)。5.ODN处理组与空白对照组相比,IRF7、MyD88和MxA表达明显上调(P<0.05),而ISG56基因表达与空白对照组无明显差别;冰毒/ODN处理组IRF7、MyD88、MxA和ISG56基因表达量显著低于ODN处理组(P<0.05);加入多巴胺受体阻滞剂预处理后,冰毒/ODN/SCH处理组MyD88和ISG56基因表达量与冰毒/ODN2216组相比明显上升(P<0.05),而IRF7和MxA的基因表达则无明显变化。结论:1.冰毒可能通过抑制巨噬细胞TLR-9的表达,下调内源性IFN-α的产生。2.冰毒可以明显减弱CpG-ODN介导细胞中TLR-9及IFN-α表达。3.冰毒可以下调TLR-9对IRF7、MyD88、MxA和ISG56等细胞因子的诱导.4.冰毒削弱TLR-9调节免疫细胞因子表达的作用可被多巴胺受体D1阻滞剂阻断。