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背景与目的:1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)是一种以胰岛B细胞选择性破坏为特征的代谢紊乱性自身免疫性疾病,机体针对表达于B细胞的多种分子抗原引起自身免疫损伤,导致胰岛B细胞数量的进行性减少,从而引起胰岛素分泌绝对缺乏。锌是胰岛素储存和分泌机制中的一个重要组分,B细胞需要有效且特异的转运蛋白来累积足够量的锌。最近发现的阳离子外流锌转运蛋白ZnT8 (SLC30A8)是人类T1D的主要自身抗原之一,具有高度B细胞特异性,其通过影响锌离子浓度而在胰岛素合成和分泌中发挥重要作用。T1D患者中SLC30A8基因位点上aa325的多态性现象决定了其自身抗体多肽的特异性,ZnT8自身抗体(ZnT8A)对自身免疫性糖尿病有着重要的诊断与预测价值。联合检测ZnT8A和谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞瘤相关蛋白-2抗体(IA-2A)和胰岛素抗体(IAA)三种胰岛自身抗体,有助于在人群中筛查出临床前期T1D患者并可鉴别诊断临床期T1D患者。试验方法:1,标本来源:临床确诊的T1D患者152例,年龄2-56岁,平均(20±11)岁,其中男80例,女72例,病程0.0-16.0年。T2D患者126例,年龄30-64岁,平均(36±9)岁,其中男66例,女60例。1型和2型糖尿病均为江苏地区门诊和住院患者,符合1999年WHO糖尿病诊断标准。健康对照组102名,年龄13-28岁,平均(23±4)岁,其中男52名,女50名,均无糖尿病家族史和自身免疫性疾病史,空腹和餐后2h血糖均正常,所有入选者排除心、肝、肾等器质性疾病及内分泌急性并发症,所有试验对象均取得知情同意。阳性和阴性质控血清标本均取自于美国Barbara Davis Center for Childhood Diabetes实验室。2,胰岛自身抗体ZnT8A及GADA、IA-2A、IAA的检测:患者及健康对照组清晨抽取空腹静脉血,离心后收集血清,运用放射免疫沉淀法(radio-immunoprecipitation assay)检测胰岛ZnT8A、GADA、IA-2A及IAA四种自身抗体,结果用抗体指数来表示。3, SLC30A8基因rs13266634位点的多态性分析:抽提患者DNA后采取聚合酶链-限制性片段长度多态性分析(Polymerase Chain reaction and restriction fragment polymorphism,PCR-RFLP)技术,PCR产物用限制性内切酶Pvuii酶切,在1.5%的琼脂糖电泳后于紫外灯下观察酶切结果。实验结果:1.在T1D患者组中,ZnT8A阳性率为46.7%(71/152), GADA为42.8%(65/152), IA-2A为36.2%(55/152),IAA 27.0%(41/152),在T2D组中ZnT8A为1.6%(2/126),GADA3.2%(4/126),IA-2A1.6%(2/126),无IAA阳性检出者。正常人ZnT8A为1.0%(1/102),GADA为1.0%(1/102),正常人无IA-2A及IAA阳性者。T1D患者血清中ZnT8A、GADA、IA-2A和IAA检测阳性率均显著高于T2D组和对照组(P<0.01)。四种抗体检测的阳性率依次为GADA>ZnT8A> IA-2A>IAA, T1D组GADA及ZnT8A阳性率分别与IAA比较,P<0.01,具有统计学意义,联合检测四种胰岛自身抗体的阳性率显著高于单项抗体检测阳性率(P<0.01)。2.在T1D患者基因组DNA中,SLC30A8基因rs13266634位点上的325Arg(CC)率为32.2%(49/152),325Trp(TT)率为21.7%(33/152),46.1%(70/152)为CT杂合子。健康对照组中,325Arg(CC)为45.3%(48/106),325Trp(TT)为21.7%(23/106),33.0%(35/106)为CT杂合子,T2D组325Arg(CC)为46.0%(58/126),325Trp(TT)为12.7%(16/126),41.3%(52/126)为CT杂合子,T1D组与健康对照组在aa325位点上基因分布频率无显著差异性,ZnT8A阳性的T1D患者组中,携带有aa325Arg(CC)基因型为42.3%,抗体阳性组与抗体阴性组在aa325基因位点上的多态性分布无显著差异性。结论:ZnT8自身抗体对自身免疫性糖尿病有着重要的诊断与预测价值,且联合检测ZnT8A、GADA、IA-2及IAA四种抗体的阳性检出率高于单个抗体或两两抗体的阳性检出率,有助于T1D患者的预测、早期诊断以及糖尿病的分型,可在临床上指导治疗。T1D患者中ZnT8抗体阳性组与抗体阴性组在SLC30A8 rs13266634基因位点上的多态性分布无明显差异性,另T1D患者中rs13266634基因多态性与健康对照组之间亦无显著差异性,可得出结论其基因多态性可能与中国江苏地区人群T1D发病风险无相关性。