论文部分内容阅读
目的观察氟西汀对野百合碱所致的大鼠肺动脉高压的形成和演变的影响并探讨其可能的机制。方法110只健康Wistar大鼠被随机分为四组：M+F组、M/F组及MCT组大鼠首先均给予一次MCT(60mg/kg)皮下注射。M+F组大鼠自第四周开始给予氟西汀(10mg/kg)灌胃,每日一次,连续用药9周。M/F组自第四至六周末给予每日一次氟西汀(10 mg/kg)灌胃。MCT组自第四周开始给予等体积的盐水灌胃；Saline组试验观察期间均给予等体积的0.9%盐水皮下注射和灌胃。实验总共观察12周,分别于不同时间点观察大鼠肺组织形态学变化,并对右心室收缩压(RVSP)、管壁厚度百分比(PWT)、右心室肥厚指数(RVHI)及5—羟色胺转运体(5-HTT)的表达情况进行测定。此外,采用肺动脉平滑肌细胞(PASMC)体外培养的方法,观察5-羟色胺(5-HT)及5-羟色胺转载体(5-HTT)对体外培养的PASMC细胞增殖作用及细胞周期的影响。实验细胞分四组：正常对照组(Control):培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,不加任何干预剂；5-HT组：培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入终浓度为5μg/ml的5-HT的培养液100μl; Flu组：培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入终浓度为10μg/ml的Flu的培养液100μl; 5-HT+Flu组：培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入培养液100μl(其中5-HT终浓度为5μg/ml, Flu终浓度为10μg/ml)。四组细胞均在常规条件下培养(37℃,21%02),定时换液,分别于实验第24h、48h及72h采用MTT法分别测定各组细胞的吸光度值A490并采用流失细胞分析方法测定各组细胞不同时间点细胞周期分布特点。结果M/F组大鼠在氟西汀停药6周后出现显著的肺血管重构和右心室肥厚,而M+F组大鼠未观察到肺动脉高压复发及右心室肥厚加重。M/F组5-HTT蛋白水平在氟西汀撤药后逐渐升高,且与肺动脉高压的严重程度相平行,而M+F组在氟西汀撤药后未出现5-HTT表达增加。PASMC离体干预实验结果表明,5-HT+Flu组细胞随着氟西汀浓度增高或时间延长,A490较对照组逐渐降低。细胞周期分析显示,氟西汀作用于PASMC72h后,细胞周期分布表现为S期细胞比例下降,G0/G1期细胞比例上升。结论(1)氟西汀能有效逆转MCT诱导的大鼠肺血管重构并改善右心室肥厚,且这一作用主要与氟西汀抑制5-HTT表达上调有关。(2)持续氟西汀干预较短期氟西汀干预能有效预防大鼠PAH复发；(3)氟西汀可有效拮抗5-HT刺激所致的PASMC增殖,且这一作用可能与氟西汀阻碍PASMC向DNA合成期转化有关。