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背景与目的食管癌(esophageal cancer,EC)是世界八大常见肿瘤之一,EC主要包括两大常见病理类型:食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺细胞癌(esophageal adenocarcinoma,EAC);EC起病隐匿,死亡率居全世界肿瘤第六位。据2012年公布的数据显示每年新增EC患者约456000例死亡人数高达400000例,五年生存率仅有20%左右。EC的发病具有地域性,ESCC主要集中在亚洲地区;EAC在西方欧洲国家高发。EC起病隐匿,肿瘤分期程度直接关系到患者的预后,早期发现是改善EC患者预后的关键。micro RNAs是由18-20个核苷酸组成的非编码RNA分子,由非编码基因的内含子编码。micro RNAs广泛稳定存在于真核动物体内及植物体内。micro RNAs主要通过与靶基因m RNA的3’非编码区特异性互补结合从而抑制靶基因转录和降解靶基因,最终影响蛋白质的翻译,调控细胞的增殖、分化、凋亡等过程,起到了类似癌基因和抑癌基因的作用。mi RNA-181a/b是mi RNA-181基因家族中两个重要组成成分。mi RNA-181家族与多种肿瘤的发生有关。mi RNA-181a在ESCC转移淋巴结中的表达水平高于癌组织,且mi RNA-181a对人食管鳞癌TE11细胞的转移、迁移和侵袭能力有影响。但有关mi RNA-181家族在ESCC患者血浆中表达水平方面的报道并不多见。本实验采用q RT-PCR技术对ESCC患者和健康对照组血浆中的mi RNA-181a/b含量进行相对定量,并分析mi RNA-181a/b与ESCC患者的临床病理分期、淋巴结转移是否存在相关性,探讨mi RNA-181a/b是否可以作为预测ESCC的生物标志物。方法1研究对象收集郑州大学第一附属医院(郑州大学,郑州,中国)胸外科收治的100例ESCC患者的血浆标本作为实验组,另外收集我院同期与其年龄、性别相匹配的健康体检者血浆60例作为对照组。2标本收集、保存分别抽取实验组患者(入院第二天)和健康对照组空腹静脉血5m L;标本收集后立即进行血浆的分离,并置-80℃冰箱中保存。3血浆mi RNA的提取及表达水平检测采用Trizol法提取血浆中的总RNA;凝胶电泳鉴定RNA完整性;Nano-Drop2000C分光光度计测定RNA浓度和纯度;采用q RT-PCR方法对所有血浆标本中mi R-181a/b及内参基因U6进行检测;并以2-△Ct(△Ct=Ct目的基因-Ct内参基因)计算mi R-181a/b的相对表达量。4统计方法采用SPSS17.0统计软件(SPSS公司,美国)及Graphpad 6.01软件(Graphpad公司,美国)进行统计学分析和图形绘制。mi R-181a/b的相对表达量以2-△Ct计算并对数据做以2-△Ct为底的对数转换。正态计量资料数据结果以X—±S表示及非正态计量资料数据结果以中位数表示;两独立样本采用t检验;相关性分析采用Spearman相关性检验;非正态分布采用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test),肿瘤标志物的临床诊断价值分析采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析并计算曲线下的面积(area under the curve,AUC);检验水准均为ɑ=0.05。结果1、mi RNA-181a在ESCC患者血浆中的表达水平[3.875,(3.613,4.175)]显著高于正常人中表达水平为[3.254,(2.516,3.507)],两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。mi RNA-181b在ESCC患者血浆中的表达水平[3.587;(3.286,3.805)]显著高于正常人中表达水平为[2.977,(2.507,3.121)],两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。2、对ESCC患者按照不同病理类型特征进行分类:血浆中mi RNA-181a/b在Ⅲ/Ⅳ期中的表达量高于Ⅰ/Ⅱ期的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移阳性患者血浆中mi RNA-181a/b的表达量高于淋巴结转移阴性患者的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤位置及吸烟饮酒与否的ESCC患者血浆中mi RNA-181a/b的表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。3、血浆中mi RNA-181a与mi RNA-181b在ESCC患者中(r2=0.043,P=0.057)及健康对照组中(r2=0.39,P=0.361)的表达均无相关性。4、ROC曲线分析结果显示:当cut-off值为3.67时mi RNA-181a诊断ESCC的曲线下面积AUC为0.823,灵敏度和特异度分别为85%和72%;当cut-off值为3.95时mi RNA-181b诊断ESCC的AUC为0.823,灵敏度和特异度分别为85%和72%;当cut-off值3.22时mi RNA-181a和mi RNA-181b联合诊断ESCC的AUC为0.892灵敏度和特异度分别为87%和74%。结论在ESCC患者血浆中mi R-181a/b的表达水平升高,展现了其诊断ESCC的临床价值;并且mi R-181a/b的表达水平与ESCC患者的TNM肿瘤分期及淋巴结转移呈现正相关,说明mi R-181a/b可能在ESCC的发生发展中具有调控作用;进一步分析mi R-181a及mi R-181b在ESCC患者血浆中的表达无相关性,推测mi R-181a及mi R-181b可能通过调控不同信号通路调控ESCC的发生发展。