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人参皂甙Rg3是人参(Panax ginseng C.A.Meyer)的有效成分,近年来的研究证实Rg3具有诱导肿瘤细胞凋亡,选择性抑制肿瘤细胞黏附和浸润,抑制肿瘤新生血管形成等抗肿瘤作用。同时可调节机体免疫功能,增强机体非特异性免疫功能等作用,被认为是一种免疫增强剂。树突状细胞(dendritic cell,DC)是一种功能极强的抗原提呈细胞,在免疫应答中居于重要地位。在机体发生免疫反应时,DC可高效地促进机体生成细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)和辅助性T细胞(helper T cells,Th细胞),并产生免疫应答,DC不但是机体免疫反应的启动者,也是参与者。由DC激活的CTL介导的细胞免疫应答在对恶性肿瘤的发生、发展及预后发挥着极其重要的作用。肾癌是泌尿系统常见的肿瘤之一,与大多数肿瘤一样,治疗效果不尽人意,多数患者死于肿瘤转移。故对肾癌迁徙转移的研究一直是学者们探讨的热点之一。本研究用Rg3联合细胞因子诱导DC,用小鼠肾癌细胞株RAG致敏Rg3-DC诱导CTL,利用Rg3对DC的免疫增强作用及Rg3抗肿瘤的作用机制具有多抗靶点、多环节、多效应的特点,以体外培养的RAG细胞为研究对象,观察比较RAG致敏的Rg3-DC与常规DC对RAG细胞增值、迁徙、杀伤以及免疫学功能的影响,目前尚未见报道。同时进一步探讨Rg3诱导DC的抗肿瘤机制,为制备新型增效的DC奠定理论基础。目的:1探讨Rg3促进DC的免疫增强作用,比较Rg3-DC与常规DC对T细胞的影响;2以小鼠肾癌细胞株RAG为对象,研究Rg3增强RAG细胞致敏的DC诱导的CTL,对肿瘤抑制、侵袭、转移和免疫学功能的影响,探讨Rg3增强DC免疫功能的抗肿瘤机制。方法:1 Rg3激活DC功能的研究,用流式术(Flow Cytometry,FCM)FCM检测DC表面分子(CD11c PE、CD80、CD86、MHCⅡ)的表达,观察经不同浓度Rg3(2μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)处理6d后Rg3对DC成熟度的影响;2 Rg3增强RAG细胞致敏的DC对不同浓度同种异体小鼠T细胞(DC:T:1:100、1:10、1:1)混合培养48h,用CCK8法检测T细胞增殖率,ELISA法检测免疫功能;3将诱导的CTL细胞与RAG细胞混合培养(CTL:RAG效靶比:10:1、20:1、40:1),18h后用FCM检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡基因(Bax,Bcl-2);4 Transwell、划痕愈合实验证明Rg3-DC+T对RAG细胞迁徙及转移的影响。结果:1人参皂甙Rg3能够促进DC的成熟,FCM检测结果显示,在一定的时间范围内,与对照组相比,随着Rg3浓度的升高,被诱导的DC表达CD86、MHCⅡ、CD11c水平随之升高(P<0.05),CD80在不同作用时间范围内随时间延长,表达增高(P<0.05);而Rg3的浓度变化对CD80无明显影响。2随着Rg3浓度的增加及DC:T比值增大,被诱导的CTL细胞增殖量增加,统计学分析P<0.0001。CTL细胞表达IL-2、IFN-γ的水平随着Rg3浓度的升高而升高。统计学分析P<0.0001。3 FCM检测结果显示,Rg3-DC诱导的CTL细胞与RAG细胞混合培养时,效靶比值越高CTL诱导细胞凋亡的能力越强P<0.0001;Bax/Bcl-2增大P<0.05。4 Transwell小室细胞侵袭实验及划痕愈合实验证明Rg3-DC诱导的CTL细胞对体外培养的RAG细胞有显著影响。结论:(1)人参皂甙Rg3具有促进树突状细胞分化成熟及刺激淋巴细胞的增值的作用,且有一定的量效关系;(2)抗原致敏的Rg3-DC对CTL细胞的增值作用说明一定浓度的Rg3能够优化DC,使其捕捉抗原的能力及激活CTL的能力增强。(3)本研究中的CTL细胞对小鼠肾癌细胞株RAG的生长、侵袭和转移有抑制作用。