论文部分内容阅读
目的 建立大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)体外分离、培养、传代及诱导分化的实验方法;观察MSCs能否经体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导分化为心肌样细胞:探讨MSCs同种异体移植治疗急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)的可行性。 方法 2月龄健康雌性Wistar大鼠55只,5只用于提供MSCs;余50只用于建立AMI模型,随机分为两组,MSCs移植组和对照组各25只。 取大鼠双侧股骨、胫骨、肱骨,用DMEM培养液反复冲洗骨髓腔,将冲洗液移入培养瓶培养。以贴壁筛选法分离、纯化MSCs。当MSCs达80%融合时消化传代。MSCs传至第3代覆盖瓶底达50%时开始加入终浓度为10μmol/L的5-aza诱导,作用24h。以后每代细胞覆盖瓶底达50%时均给予5-aza诱导1次。用荧光相差显微镜观察各代细胞的形态改变和生长分化情况。以传至第15代达80%融合、5-aza诱导13次、培养达4个月之久的MSCs作为移植细胞备用。少量移植细胞用于透射电镜观察和免疫组化鉴定心肌特异性蛋白,余者均在5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,BrdU)标记后用于移植。 应用液氮冷冻法制作大鼠AMI模型,选择梗死灶及其周围共四个位点为注射点,移植组每点注入MSCs悬液70μl(4～5×10~6个细胞),对照组注入等量DMEM液。分别于术前1天、术后1周、术后4周行组织多普勒超声心动图(Tissue Doppler Echocardiography,TDE)检查,以收缩期峰值速度(Systolic Peak Velocity,Vs)、左室舒张末容积(Left Ventricle End Diastolic Volume,LVEDV)和左室射血分数(Left Ventricle Ejection Fraction,LVEF)为指标评价心功能。移植组于